| 描述 | SDS,，也稱十二烷基硫酸鈉（Sodium Dodecyl Sulfate）,，是一種常見(jiàn)的陰離子去垢劑，常用于變性蛋白,。SDS 裂解液（SDS Lysis Buffer）是一種比較強(qiáng)烈的細(xì)胞組織裂解液,，主要成分為50mM Tris-HCl（pH 8.1），1% SDS 以及焦磷酸鈉,，正釩酸鈉,，氟化鈉，EDTA 等多種抑制劑,，可廣譜且有效抑制蛋白降解,，經(jīng)本品裂解所得的蛋白樣品，適用于常規(guī)的蛋白免疫印跡（Western Blot）,，染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）等實(shí)驗(yàn),。
產(chǎn)品組分： | 組分 | 名稱 | 規(guī)格 | 保存方法 | | A | SDS Lysis Buffer | 100ml | -20℃保存 | | B | PMSF（100mM） | 1ml | -20℃保存 |
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| 使用方法 | 1、培養(yǎng)的細(xì)胞樣品：
（1）充分融解 SDS 裂解液,，之后混勻,。取適當(dāng)量的裂解液，使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF（100mM）,，使其最終濃度為 1mM,。
（2）貼壁細(xì)胞：吸除培養(yǎng)液,，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍（如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾,，可忽略此步）,。按照六孔板的每孔細(xì)胞加入 150-250ul 裂解液的比例加量。用槍吹打數(shù)下,，使裂解液和細(xì)胞充分接觸,。通常裂解液接觸細(xì)胞 1-3 秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。如果提取的蛋白樣品用于 ChIP，應(yīng)置于冰上或 4℃裂解 15-30min。
（3）懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指彈散細(xì)胞,。按照六孔板的每孔細(xì)胞加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬(wàn)細(xì)胞/管,，然后再裂解,。如果提取的蛋白樣品用于 ChIP，應(yīng)置于冰上或 4℃裂解 15-30min,。
（4）充分裂解后,，10,000-14,000g 離心 3-5 分鐘，取上清,，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE,、WB 和 ChIP 等操作。
【裂解液用量說(shuō)明】：通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠,，如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200uμl 或 250ul,。如果用于 ChIP，建議 6 孔板每孔細(xì)胞至少加入 200ul 裂解液,。
2,、組織樣品：
（1）將組織切成細(xì)小的碎片。
（2）充分融解 SDS 裂解液,，之后混勻,。取適當(dāng)量的裂解液，使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF（100mM）,，使其最終濃度為 1mM,。
（3）按照每 20mg 組織加入 150-250ul 裂解液的比例加量。
【注意：如果裂解不充分可以適當(dāng)添加用量,，如果需要高濃度的蛋白樣品,，可適當(dāng)降低用量,。】
（4）用玻璃勻漿器勻漿直至充分裂解,，此過(guò)程盡量控制在 1-2 分鐘內(nèi),，以減少蛋白的降解。如果提取的蛋白樣品用于 ChIP,，應(yīng)置于冰上或 4℃繼續(xù)裂解 10-20min,。
（5）充分裂解后，10,000-14,000g 離心 3-5 分鐘,，取上清,，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、WB 和 ChIP 等實(shí)驗(yàn),。
（6）如果組織樣品本身非常細(xì)小,，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)高強(qiáng)度的漩渦混勻器使樣品裂解充分,，之后同樣離心取上清,，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,，不必使用勻漿器,，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解的足夠充分。 |
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