脂質(zhì)是一類廣泛存在于生物體中的有機(jī)分子,，它們?cè)诩?xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能中扮演著重要角色,。脂滴和膽固醇是脂質(zhì)的不同形式，它們?cè)诮Y(jié)構(gòu)和功能上有所不同,。脂滴是中性脂的主要貯存場(chǎng)所,，包括脂酰甘油和酯化膽固醇。在病理情況下,，如器官發(fā)生脂肪變性,，細(xì)胞內(nèi)可能出現(xiàn)脂滴增多，通過(guò)脂肪染色能將這些脂滴清晰的顯現(xiàn)出來(lái),。膽固醇是真核細(xì)胞細(xì)胞膜的重要成分,，能夠維持膜結(jié)構(gòu)完整性,，調(diào)節(jié)膜流動(dòng)性，參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),，在動(dòng)脈硬化,、Ｃ型尼曼匹克病(Niemann-Pick disease type C, NPC)、阿爾茨海默病等疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用,。
脂滴和膽固醇的染色是病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究中的重要技術(shù),，用于觀察和量化細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的積累。目前,，脂滴染色使用zui廣泛的染料包括油紅O(Oil Red O),、尼羅紅(Nile Red)、蘇丹染料(Sudan Dyes)等,。膽固醇染色使用最多的染料是菲律平(Filipin III),，Filipin已被廣泛應(yīng)用30余年。它可用于標(biāo)記生物膜結(jié)構(gòu)上及非細(xì)胞結(jié)構(gòu)內(nèi)的自由膽固醇,，也能配合應(yīng)用膽固醇酯化酶,，使膽固醇酯水解成自由膽固醇而間接顯色。
接下來(lái),，小愛(ài)就給大家詳細(xì)介紹脂滴和膽固醇的染色方法,。
一、脂滴染色
1,、組織切片脂滴油紅O(abs42024259)染色
1）實(shí)驗(yàn)原理
油紅O屬于偶氮染料,，是很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑，與甘油三酯結(jié)合呈小脂滴狀,。脂溶性染料能溶于組織和細(xì)胞中的脂類,，它在脂類中的溶解度比在溶劑中大。當(dāng)組織切片置入染液時(shí),，染料則離開染液而溶于組織內(nèi)的脂質(zhì)（如脂滴）中,，使組織內(nèi)的脂滴呈橘紅色。
2）染色步驟[1]
① 油紅O染色液配制：
a.母液準(zhǔn)備：稱取1g油紅O,，加入100mL異內(nèi)醇配置成儲(chǔ)存液,，棕色瓶4℃密封保存。
b.工作液準(zhǔn)備：使用前加雙蒸水稀釋至60%,，濾紙過(guò)濾后使用,。
② 用冰凍切片機(jī)切取5μm厚的肝組織切片；
③ 用95%乙醇固定,，蒸餾水清洗1min,，60%異丙醇浸泡30min；
④ 再用60%油紅O染色溶液處理10min和15min,，蒸餾水沖洗1min,；
⑤ 蘇木素復(fù)染,，用自來(lái)水清洗1~3min，光鏡下觀察肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積情況,。
3）肝組織油紅O染色結(jié)果圖：
（注：圖片來(lái)源于文獻(xiàn)[1]）
2,、細(xì)胞脂滴尼羅紅(abs9114)染色（以下染色方法僅供參考）
1）實(shí)驗(yàn)原理
尼羅紅是一種親脂性熒光染色劑，它是一類環(huán)境敏感性熒光染料,，能夠在富含脂質(zhì)的環(huán)境中產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光,，而在水性介質(zhì)中的熒光強(qiáng)度極小，這種特性使得它成為了一款極重要檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂滴的熒光指示劑,，可以通過(guò)熒光顯微鏡和流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果,。
2）染色步驟
① 尼羅紅染色液配制：
a.母液準(zhǔn)備：取適量的尼羅紅（Mw：318.37g/mol）用無(wú)水DMSO充分溶解制備1mM儲(chǔ)存液，按照單次用量分裝凍存,，避免反復(fù)凍融,，避光保存。
b.工作液準(zhǔn)備：用HHBS或生理緩沖液(pH 7.0)將母液按1:1000稀釋為1×尼羅紅工作液,，漩渦混勻,。
【注意】：
尼羅紅的實(shí)際染色濃度請(qǐng)參考文獻(xiàn)或?qū)嶒?yàn)室體系來(lái)調(diào)整。以上只做參考,。
② 用檢測(cè)化合物處理細(xì)胞一段時(shí)間,；
③ 離心并調(diào)整細(xì)胞濃度為1-5×105cell/管；
④ 用500µL尼羅紅工作液重懸細(xì)胞,；
⑤ 室溫或37oC避光孵育5-10min,；
⑥ 吸掉染色工作液，用HHBS或適當(dāng)緩沖液清洗細(xì)胞,；
⑦ 用500µL預(yù)熱的HHBS或培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，使細(xì)胞密度為1-5×105cell/管；
⑧ 熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光信號(hào),，Ex/Em=552/636nm,。
【注意】：
① 對(duì)于貼壁細(xì)胞，可用HHBS或適當(dāng)緩沖液清洗細(xì)胞,，然后直接加入尼羅紅工作液孵育,；
② 細(xì)胞也可預(yù)固定，然后用尼羅紅工作液染色,。
二、膽固醇染色
細(xì)胞膽固醇菲律平(Filipin III, abs42018484)染色
1）實(shí)驗(yàn)原理
菲律平的主要成分是Filipin III,，它可以特異性地與游離膽固醇相互作用,，而不與酯化的膽固醇結(jié)合。這種特異性結(jié)合是由于菲律平分子結(jié)構(gòu)中包含多個(gè)共軛雙鍵,，使其能夠與膽固醇分子的疏水部分形成復(fù)合物,。當(dāng)Filipin III與游離膽固醇結(jié)合后,，其激發(fā)光譜波峰約在360nm處，發(fā)射光譜波峰約在480nm處,。通過(guò)檢測(cè)這些特定波長(zhǎng)附近的熒光信號(hào),，可以表征細(xì)胞內(nèi)的膽固醇含量。
2）染色步驟[2]
① 菲律平染色液配制：
a.母液準(zhǔn)備：1mg菲律平粉末中加入1mL DMSO,，完quan溶解配置成1mg/mL儲(chǔ)存液,，按照單次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融,，避光保存,。
b.工作液準(zhǔn)備：使用前，取適量母液加入到PBS中,，稀釋成一定濃度的工作液（如0.1mg/mL）備用,。
② 將細(xì)胞接種于蓋玻片中，培養(yǎng)12-18h,；
③ 用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次后,，在室溫下用4%多聚甲醛固定20min；
④ 室溫下用0.1mg/mL菲律平III處理細(xì)胞30min,；
⑤ 細(xì)胞再用0.35μg/mL碘化丙啶(PI)染色5min,；
⑥ 最后，用共聚焦激光掃描顯微鏡在405nm處檢測(cè)菲律平和PI染色的熒光強(qiáng)度,。
3）星形膠質(zhì)細(xì)胞/神經(jīng)元細(xì)胞菲律平染色結(jié)果圖
（注：圖片來(lái)源于文獻(xiàn)[2]）
愛(ài)必信（上海）生物科技有限公司可為科研人員提供非常全面的細(xì)胞結(jié)構(gòu)（如細(xì)胞膜,、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核,、細(xì)胞骨架,、線粒體、溶酶體,、外泌體,、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等）染色相關(guān)染料。關(guān)于脂質(zhì)染色,，小愛(ài)今天就介紹到這里,。下期小愛(ài)將為大家介紹外泌體的標(biāo)記技術(shù)，感興趣的老師記得關(guān)注我們呦,！
參考文獻(xiàn)
[1] Ji X, Ma Q, Wang X, et al. Digeda-4 decoction and its disassembled prescriptions improve dyslipidemia and apoptosis by regulating AMPK/SIRT1 pathway on tyloxapol-induced nonalcoholic fatty liver disease in mice[J]. J Ethnopharmacol. 2023;317:116827.
[2] Huang Y, Zhang W, Guo X, et al. Cellular cholesterol loss by DHCR24 knockdown leads to Aβ production by changing APP intracellular localization[J]. J Lipid Res. 2023;64(5):100367.
脂質(zhì)染色產(chǎn)品推薦：
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | λEx/λEm (nm) | 產(chǎn)品描述 |
abs42018484 | 菲律平 | 360/480 | 測(cè)定未酯化膽固醇水平,。 |
abs42024259 | 油紅O | 628/684 | 細(xì)胞脂滴染色；組織切片脂質(zhì)染色,。 |
abs42027851 | 蘇丹Ⅳ | 255/355 | 對(duì)組織切片脂類,、甘油三酯、脂蛋白染色。 |
abs9114 | 尼羅紅 | 552/636 | 測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的脂肪滴,。 |
abs9214 | 蘇木素染液 | — | 組織學(xué)中用于細(xì)胞核的染色,。 |
abs9358 | PI染色液(紅色) | 535/617 | 細(xì)胞核染色，膽固醇染色中常與菲律平搭配使用,。 |
熒光染料產(chǎn)品推薦：
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | λEx/λEm (nm) | 產(chǎn)品描述 |
abs45153674 | DiO 高氯酸鹽(綠色) | 484/501 | 活細(xì)胞示蹤,、細(xì)胞膜染色 |
abs47048165 | DiD 對(duì)氯苯磺酸鹽(紅色) | 644/663 | 活細(xì)胞示蹤、細(xì)胞膜染色 |
abs80001 | 霍亂毒素B亞單位(CTB) | — | 神經(jīng)示蹤劑 |
abs80003 | 霍亂毒素B亞單位-FITC | 494/520 | 神經(jīng)示蹤劑 |
abs45153692 | DiR 碘化物(深紅色) | 748/780 | 動(dòng)物活體成像 |
abs42075819 | D-熒光素鉀鹽 | — | 動(dòng)物活體成像 |
abs47048270 | 羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(橙紅) | 540/565 | 細(xì)胞骨架染色(F-action) |
abs47048271 | 鬼筆環(huán)肽-Fluor 488(綠色) | 493/517 | 細(xì)胞骨架染色(F-action) |
abs47048272 | 鬼筆環(huán)肽-Fluor 555(橙紅) | 556/574 | 細(xì)胞骨架染色(F-action) |
abs47014944 | 鈣黃綠素紅(紅色) | 560/574 | 細(xì)胞質(zhì)染色 |
abs9106 | CFSE(綠色) | 492/517 | 細(xì)胞質(zhì)染色 |
abs42006041 | DASPEI | 550/573 | 線粒體染色 |
abs9103 | JC-1 | 585/590 | 線粒體膜電位檢測(cè) |
abs47038870 | 溶酶體綠色熒光探針 | 504/511 | 溶酶體染色 |
abs47038871 | 溶酶體紅色熒光探針 | 577/590 | 溶酶體染色 |
abs9819 | PKH26紅色熒光細(xì)胞連接試劑盒 | 551/567 | 外泌體染色 |
abs9820 | PKH67綠色熒光細(xì)胞連接試劑盒 | 490/502 | 外泌體染色 |
abs47038874 | 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)綠色熒光探針 | 489/520 | 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色 |
abs47038875 | 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針 | 587/615 | 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色 |
abs47047616 | DAPI染色液(藍(lán)色) | 364/454 | 細(xì)胞核染色 |
abs813337 | Hoechst 33342(藍(lán)色) | 350/461 | 細(xì)胞核染色 |
abs9104 | 7-AAD(紅色) | 545/650 | 細(xì)胞核染色 |
abs9358 | PI染色液(紅色) | 535/617 | 細(xì)胞核染色 |
abs45153639 | Fluo 3-AM | 506/526 | 鈣離子(Ca2+)探針 |
abs42197174 | DCFH-DA | 502/523 | 活性氧(ROS)探針 |
abs42016243 | DAF-2 DA | 491/513 | 一氧化氮(NO)探針 |
abs47044989 | WSP-1 | 465/515 | 硫化氫(H2S)探針 |
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC,、IHC,、凋亡、ELISA,、ChIP,、Co-IP、TR-FRET,、生化檢測(cè),、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè)),；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒,；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒),；化合物大包裝；輔助試劑,、耗材/儀器,、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27,、N2,、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE,、百日咳毒素PTX,、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
9
立即詢價(jià)
您提交后,，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)