日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

免疫組化(IHC)是一種用于檢測(cè)組織或細(xì)胞中特定蛋白質(zhì)表達(dá)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)在醫(yī)學(xué)研究和診斷中非常重要,，但實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能會(huì)遇到一些問題,。讓小愛帶你來(lái)看看常見問題的應(yīng)對(duì)策略吧~

無(wú)染色

1、一抗和二抗不兼容

- 使用抗一抗種屬來(lái)源的二抗（例如,，如果一抗是兔來(lái)源的,，則使用抗兔的二抗）。確認(rèn)二抗是否識(shí)別一抗的亞型,。

2,、沒有足夠的一抗與目的蛋白結(jié)合

- 使用更高濃度的抗體。

- 4℃下長(zhǎng)時(shí)間孵育（如過(guò)夜孵育）,。

3,、抗體可能不適用于IHC，因?yàn)槠淇赡軣o(wú)法識(shí)別蛋白的天然(3D)形式

- 查看抗體使用說(shuō)明書,，確認(rèn)抗體是否經(jīng)過(guò)IHC驗(yàn)證以及驗(yàn)證的IHC類型（福爾馬林或PFA固定,、冰凍切片等）。在ICC或IP中成功使用抗體也能說(shuō)明抗體可以識(shí)別天然形式的蛋白,。

- 在天然（非變性）WB中檢測(cè)抗體,，以確保其仍然有效。

4,、一抗/二抗/信號(hào)放大試劑盒可能因儲(chǔ)存不當(dāng),、稀釋不當(dāng)或多次反復(fù)凍融而失去活性

- 設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，以確保這些試劑仍然有效,。

5,、該蛋白不存在于目標(biāo)組織中

- 設(shè)置文獻(xiàn)中或抗體供應(yīng)商推薦的陽(yáng)性對(duì)照。

6,、目的蛋白在組織中含量并不豐富

- 采用信號(hào)放大步驟,，將信號(hào)zui大化。

7,、二抗未避光保存（進(jìn)行熒光檢測(cè)時(shí)）

- 始終避免二抗暴露于光照中,。

8、脫蠟可能不充分

- 延長(zhǎng)切片的脫蠟時(shí)間，使用新配制的二甲苯,。

9,、固定步驟可能會(huì)改變抗體識(shí)別的抗原表位

- 使用不同的抗原修復(fù)方法來(lái)暴露抗原表位（包括使用pH值為6或9的緩沖液進(jìn)行熱抗原修復(fù)、酶抗原修復(fù)等）,。

- 縮短切片固定時(shí)間,。

10、抗體不能穿透蛋白所定位的細(xì)胞核（核蛋白）,。

- 向封閉緩沖液和抗體稀釋液中加入強(qiáng)效通透劑（如Triton™ X-100,，貨號(hào)：abs9149）。

11,、PBS緩沖液被細(xì)菌污染,，細(xì)菌會(huì)破壞目的蛋白上的磷酸基團(tuán)（磷酸化蛋白）

- 在PBS抗體儲(chǔ)存緩沖液中加入0.01%疊氮化物或使用新配制的無(wú)菌PBS。

12,、抗原修復(fù)不全,，對(duì)于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來(lái)打開抗原表位，以利于與抗體結(jié)合

- 建議微波修復(fù)用高火4次*6min試試,。有人做過(guò)實(shí)驗(yàn)，這是最佳的時(shí)間和次數(shù),。若不行,，還可高壓修復(fù)。

非特異染色

1,、一抗/二抗?jié)舛瓤赡苓^(guò)高

- 嘗試降低抗體濃度或縮短孵育時(shí)間,。與不表達(dá)靶蛋白的組織的信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行比較。

2,、內(nèi)源性過(guò)氧化物酶具有活性

- 使用酶抑制劑,，即對(duì)AP使用左旋咪唑(2mM)，或?qū)^(guò)氧化物酶使用H2O2(0.3% v/v),。

3,、使用與染色組織相同種屬來(lái)源的一抗（例如在小鼠組織上使用小鼠一抗）。應(yīng)用二抗時(shí),，由于二抗是靶向組織種屬的,，與組織中的免疫球蛋白或蛋白的Fc片段結(jié)合

- 使用種屬來(lái)源與組織切片不同的一抗，或用F(ab)片段二抗封閉,。

4,、切片/細(xì)胞已干燥

- 保持切片/細(xì)胞高度濕潤(rùn)，勿讓其變干,。

5,、一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色

- 建議試用單克隆抗體看看。

6,、非特異性組分與抗體結(jié)合

- 這需要通過(guò)延長(zhǎng)二抗來(lái)源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來(lái)加強(qiáng)封閉效果,。

組織形態(tài)不清晰或受損

1,、抗原修復(fù)方法可能過(guò)于苛刻

- 改變抗原修復(fù)步驟或嘗試不同的抗原修復(fù)方法。

2,、組織可能未充分固定

- 延長(zhǎng)固定時(shí)間,。

- 提高固定劑與組織的比例。

- 切割更小塊的組織,，進(jìn)行更有效的固定（浸泡固定）,。

3、組織切片從載玻片上脫落（冰凍切片）

- 延長(zhǎng)固定時(shí)間,。

- 嘗試更換固定劑,。

- 使用新鮮制備的載玻片。

4,、組織切片撕裂或折疊,，或切片下方可見氣泡

- 使用鋒利的刀片重新切片。

- 研究不受影響的組織區(qū)域,。使用PAP筆（貨號(hào)：abs929）定位試劑,。

5、組織形態(tài)難以分辨

- 將組織切片切的更薄,。

- 冰晶可能破壞切片形態(tài)

- 重新切片,，快速冷凍（冷凍切片）。

6,、組織自溶

- 延長(zhǎng)固定時(shí)間,。

- 增加固定劑相對(duì)于組織的比例。

- 嘗試使用交聯(lián)固定劑,。

高背景

1,、沒有對(duì)非特異性結(jié)合進(jìn)行封閉或封閉不充分

- 延長(zhǎng)封閉時(shí)間，并考慮更換封閉試劑,。如果使用血清,，我們推薦使用二抗種屬的10%正常血清封閉1h（貨號(hào)：abs933）?；蛘?，嘗試采用商品化的封閉緩沖液，或使用樣本種屬免疫球蛋白預(yù)吸附的二抗,。

2,、一抗?jié)舛瓤赡苓^(guò)高

- 測(cè)試抗體的最佳濃度，梯度稀釋抗體,，并在4℃下孵育,。

3、孵育溫度可能過(guò)高

- 4℃下孵育切片。

4,、二抗可能存在非特異性結(jié)合

- 使用不加一抗的二抗對(duì)照,。

- 如果在單獨(dú)使用二抗時(shí)觀察到著色，則應(yīng)更換二抗,，或使用樣本種屬免疫球蛋白預(yù)吸附的二抗,。

5、組織洗滌不充分,；仍然存在固定劑

- 各個(gè)步驟之間,，用PBS或TBS充分洗滌組織。添加表面活性劑,，例如0.1% Triton,。

6、內(nèi)源性過(guò)氧化物酶具有活性

- 使用酶抑制劑,，即對(duì)AP使用左旋咪唑(2mM),，或?qū)^(guò)氧化物酶使用H2O2 (0.3% v/v)。

7,、固定步驟導(dǎo)致自發(fā)熒光（如果使用熒光檢測(cè)）

- 福爾馬林/PFA通常會(huì)在綠色光譜中產(chǎn)生自發(fā)熒光,，因此可以嘗試使用紅色光譜范圍內(nèi)的熒光基團(tuán)。

- 如果有可用的紅外檢測(cè)系統(tǒng),，則使用紅外范圍內(nèi)的熒光基團(tuán),。

8、組織內(nèi)自發(fā)熒光（如果使用熒光檢測(cè)）

-如果自發(fā)熒光不需要保留,，可以使用組織自發(fā)熒光淬滅劑（貨號(hào)：abs9860）

9、信號(hào)放大過(guò)多（間接檢測(cè)技術(shù)）

- 縮短信號(hào)放大試劑孵育時(shí)間,，稀釋二抗或信號(hào)放大試劑,。

10、底物過(guò)多（酶檢測(cè)）

- 進(jìn)一步稀釋底物,，或縮短底物孵育時(shí)間,。

11、色原與組織樣品中存在的PBS反應(yīng)（酶檢測(cè)）

- 先使用Tris緩沖液洗滌切片,，再與底物一起孵育,，然后在Tris緩沖液中洗滌切片/細(xì)胞（特別注意，僅適用于AP）,。

IHC實(shí)驗(yàn)雖然在技術(shù)上要求較高,，但通過(guò)仔細(xì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、嚴(yán)格的操作流程和及時(shí)的問題解決,，可以獲得高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。面對(duì)IHC實(shí)驗(yàn)中的問題，研究人員需要耐心和細(xì)致，不斷優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,，以確保實(shí)驗(yàn)的成功,。

小愛好物推薦：

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC,、凋亡,、ELISA、ChIP,、Co-IP,、TR-FRET、生化檢測(cè),、殘留檢測(cè),、多因子檢測(cè))；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子),、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒),；化合物大包裝,；輔助試劑、耗材/儀器,、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE,、B27、N2,、霍亂毒素B亞單位CTB,、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX,、重組人胰島素Insulin,、人源低密度脂蛋白LDL...