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在實驗室常用的免疫學實驗中,，抗體是不ke或缺的試劑之一,。合適的抗體能提高我們的工作效率，節(jié)約時間,。一旦抗體選得不合適,，可能會事倍功半，甚至導致實驗失敗,。到底怎樣才能選到合適的抗體呢,？小愛特地推出《抗體選擇zui全指南》專題，專題會包含五篇文章：抗體小知識,、抗體選擇的基本原則,、WB抗體如何選擇、IHC/ICC/IF抗體如何選擇以及質(zhì)譜流式(CytoF)抗體如何選擇,，幫助大家梳理一下抗體選擇的知識和技巧,，今天給大家?guī)淼谝黄嚎贵w小知識。

抗體的結(jié)構(gòu)

抗體以一個或者多個Y字形單體存在,，每個Y字形單體由4條多肽鏈組成,，包含兩條分子量較大的重鏈(Heavy chain，H)和兩條分子量較小的輕鏈(Light chain,，L),。重鏈包含1個可變區(qū)(VH)和3個恒定區(qū)(CH)，輕鏈包含1個可變區(qū)(CH)和1個恒定區(qū)(CL),。相鄰的重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)形成抗原結(jié)合位點,。Fc段可以直接結(jié)合酶或者熒光染料，是結(jié)合二抗,、補體以及Fc受體的區(qū)域,。

圖 抗體的結(jié)構(gòu) (圖片來源于優(yōu)寧維網(wǎng)站)

抗體的同種型

抗體根據(jù)重鏈的不同，可分為IgA,、IgD,、IgE,、IgG和IgM五種類型,。同一類免疫球蛋白根據(jù)其鉸鏈區(qū)氨基酸組成和重鏈二硫鍵的數(shù)目和位置的差別,，又可分為不同的亞類。IgG可分為IgG1～IgG4,；IgA可分為IgA1和IgA2,。IgM、IgD和IgE尚未發(fā)現(xiàn)有亞類,。

添加抗體五種類型

（圖片來源于優(yōu)寧維網(wǎng)站）

多抗、單抗和重組抗體

抗原可以引起機體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu)叫做抗原決定簇,，也稱為抗原表位,。一個抗原可以有多種不同的抗原決定簇，機體也可以相應(yīng)產(chǎn)生不同的抗體,。按照生產(chǎn)抗體的技術(shù)不同,，抗體可分為多克隆抗體、單克隆抗體和重組抗體,。

最先出現(xiàn)的是多克隆抗體（polyclonal antibody,，簡稱pAb），它是用抗原免疫高等脊椎動物,，比如兔,、山羊等得到的。多抗可識別多個抗原,，它的優(yōu)勢是制備簡單,，成本較低，靈敏度也高,；但是這種制備方法每次都要使用動物,，批間差會比較大，非特異性背景一般相對較高,，不過這也不是絕對的,，也有一部分多抗很好用。

單克隆抗體（monoclonal antibody,，簡稱mAb）是第二代抗體,，它是用雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的抗體，只識別抗原的一個特定表位,，相對多抗來說特異性更高,，背景更低。最開始只有小鼠單抗,，最近幾年兔單抗興起,，總體而言,，兔單抗較鼠單抗有更高的特異性和靈敏度，親和力更強,，而且識別抗原表位更豐富,，包括短肽，小分子,，點突變以及翻譯后修飾(PTMs)等,。

（圖片來源于優(yōu)寧維網(wǎng)站）

最新的第三代抗體是重組抗體(recombinant antibody)，重組抗體的最大特點是編碼抗體蛋白質(zhì)的氨基酸或DNA序列是已知的,。通過重組DNA等技術(shù),，將編碼重組抗體的基因序列插入至表達載體，并將它轉(zhuǎn)入至表達宿主中（如哺乳動物細胞,、酵母或細菌）,，進而表達純化獲得。它的優(yōu)勢是批間差異極低,，特異性更高,，生產(chǎn)時間更短，但是相對來說需要更高的技術(shù),，開發(fā)和生產(chǎn)的成本也比較高,。

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抗體的分子形式

圖 抗體的分子形式 (圖片來源于優(yōu)寧維網(wǎng)站)

Fab和Fc片段：木瓜蛋白酶對抗體進行消化,，會形成兩個Fab（抗原結(jié)合）片段和一個Fc片段。

F(ab’)2片段：胃蛋白酶對抗體進行消化,，會形成F(ab’)2片段包含兩個Fab和鉸鏈,。

學后自測題

1、Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb這個抗體的名稱中,，Ser473及mAb代表什么意思,？

答案：Ser473是抗體檢測的磷酸化位點，mAb代表單抗

2,、Goat anti-Mouse IgG(H+L)-HRP Antibody這個抗體名稱中,，H+L代表什么意思？

答案：H代表Heavy chain即重鏈,，L代表Light chain即輕鏈,，H+L代表這個抗體能識別小鼠IgG的整個分子。

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC,、IHC,、凋亡、ELISA,、ChIP,、Co-IP,、TR-FRET、生化檢測,、殘留檢測,、多因子檢測)；細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子),、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒),；化合物大包裝；輔助試劑,、耗材/儀器,、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27,、N2,、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE,、百日咳毒素PTX,、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...