常規(guī)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(增殖,,凋亡,遷移,,分化之類(lèi)的),,受消化影響不是很大,如果不用胰酶去孵育而使用潤(rùn)洗的方法消化(難消化細(xì)胞例外)即可,。但少數(shù)實(shí)驗(yàn),,比如病毒包裝,對(duì)細(xì)胞代數(shù),,對(duì)細(xì)胞狀態(tài)要求*,。這個(gè)時(shí)候,胰酶消化,,就是潤(rùn)洗,,都會(huì)對(duì)細(xì)胞包裝病毒的能力有影響,傳代次數(shù)一多,,細(xì)胞包裝能力就會(huì)逐漸下降(當(dāng)然也有其它因素影響包裝效率),。這個(gè)時(shí)候都不用胰酶消化,用一些鹽溶液(不是EDTA液)即可,。這些鹽溶液通過(guò)影響ECM相關(guān)酶的活性,,來(lái)使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面,,但不切割任何蛋白。
細(xì)胞消化三種方式
機(jī)械消化法
直接用液體吹打或用刮刀,,施予外力讓細(xì)胞與培養(yǎng)底物分離,;適用于貼壁性弱的細(xì)胞傳代,但相較于其它消化方法,,這種外力無(wú)法量化控制,,細(xì)胞分散效果差,且可能會(huì)造成大量細(xì)胞破損,,使內(nèi)容物釋放到培養(yǎng)基,,進(jìn)而影響細(xì)胞傳代狀態(tài)。
離子螯合法
細(xì)胞膜表面蛋白大多需要鈣,、鎂離子來(lái)維持與胞外基質(zhì)的穩(wěn)定鍵結(jié),,當(dāng)然也包含各種黏附蛋白(例:整合素、鈣黏著蛋白,、橋粒等),,螯合劑會(huì)在不破壞細(xì)胞膜表面蛋白的狀況下,抽離這些離子,,使黏附蛋白失活而減少細(xì)胞-細(xì)胞間及細(xì)胞-底物間的連接作用,,讓細(xì)胞較容易在施予外力時(shí),脫離培養(yǎng)底物并促進(jìn)細(xì)胞分散,。
0.02% EDTA是細(xì)胞傳代常用的離子螯合劑,,在37℃作用效果很佳(消化較敏感的細(xì)胞可在4℃作用),適用于消化一般貼壁性細(xì)胞或細(xì)胞表面標(biāo)記實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,。
但EDTA無(wú)法用血清終止其反應(yīng),,所以在消化細(xì)胞后必須用緩沖鹽溶液(如:PBS)清洗離心,以免影響后續(xù)細(xì)胞貼盤(pán)效果,。
酶消化法
用蛋白水解酶消化連接細(xì)胞及培養(yǎng)底物的蛋白質(zhì),,適用于消化貼壁性稍強(qiáng)的細(xì)胞。
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