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　　蛋白酶K(ProteinaseK),，來源于林伯氏白色念球菌（TritirachiumalbumLimber）的蛋白酶K基因,，屬于絲氨酸蛋白酶類，具有*的酶活性和廣泛的底物特異性,。

　　蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的樣品處理,，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，能增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會,，提高雜交信號,。但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,，都會對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,，導(dǎo)致組織切片的脫落,，細(xì)胞核的消失，從而影響雜交結(jié)果,。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,，解決上述出現(xiàn)的問題，并能達(dá)到理想的染色效果,。

　　介紹蛋白酶K的使用方法：

　　1.配制蛋白酶K溶液：一般以20mg/ml濃度配制蛋白酶K溶液,。將200mg的蛋白酶K加入到9.5mldd水中，輕輕搖動,，直至蛋白酶K*溶解,。不要渦旋混合。加水定容到10ml,，然后分裝成小份貯存于-20℃,。

　　2.根據(jù)終濃度50—100µg/ml，吸取適量蛋白酶K溶液,，到待消化樣品中,，孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃,，孵育時間為15分鐘至48小時,；理想孵育時間為2小時。推薦反應(yīng)緩沖液：50mMTris-HCl(pH7.5),10mMCaCl2,。