針對(duì)抗體常見(jiàn)問(wèn)題
Q：做細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，要做磷酸化某因子Western Blot,，其二抗有何要求,？
A：對(duì)二抗有無(wú)要求，要看你實(shí)驗(yàn)條件來(lái)選擇,，一般推薦用HRP標(biāo)記的二抗,。
Q：免疫組化和Western Blot可以用同一種抗體嗎？
A：免疫組化時(shí)抗體識(shí)別的是未經(jīng)變性處理的抗原決定簇（又稱表位）,，有些表位是線性的,，而有的屬于構(gòu)象型；線性表位不受蛋白變性的影響,，天然蛋白和煮后的蛋白都含有,；構(gòu)象型表位由于受蛋白空間結(jié)構(gòu)限制，煮后變性會(huì)消失,。如果你所用的抗體識(shí)別的是蛋白上連續(xù)的幾個(gè)氨基酸,，也就是線性表位，那么這種抗體可同時(shí)用于免疫組化和 Western,，而如果抗體識(shí)別構(gòu)象形表位,，則只能用于免疫組化。一般抗體說(shuō)明書(shū)上都有注明此種抗體識(shí)別的氨基酸區(qū)間（限于單抗）,。而且一般的說(shuō)明書(shū)上都會(huì)寫(xiě)出用于何種實(shí)驗(yàn)類型,，參考說(shuō)明書(shū)即可。
Q：Western Blot 中抗體能重復(fù)利用嗎,？
A：抗體工作溶液一般不主張儲(chǔ)存反復(fù)使用,，但是如抗體比較珍貴，可反復(fù)使用2－3次,。稀釋后應(yīng)在2－3天內(nèi)使用，4度保存,，避免反復(fù)凍融,。
濾紙、膠和膜的問(wèn)題
Q：NC膜\ PVDF膜\ 尼龍膜有何區(qū)別,？
A：尼龍膜是較理想的核酸固相支持物,，有多種類型；硝酸纖維素膜是目前應(yīng)用zui廣的一種固相支持物，價(jià)格*,；PVDF膜介于二者之間,。
Q：做Western Blot時(shí)，PVDF膜用甲醇浸泡的目的,？
A：PVDF膜用甲醇泡的目的是為了活化PVDF膜上面的正電基團(tuán),，使它更容易跟帶負(fù)電的蛋白質(zhì)結(jié)合，做小分子的蛋白轉(zhuǎn)移時(shí)多加甲醇也是這個(gè)目的,。
Q：跑電泳的時(shí)候配的膠總是“縮”是什么原因呢,？是有的成分不對(duì)嗎？
A：有可能是膠里的水分被蒸發(fā)了,。過(guò)夜時(shí)拿保鮮膜包起來(lái),，在里面加點(diǎn)水保持濕度就可以了。也可能母液（30%聚丙酰胺）有問(wèn)題,，你可以重新配制一份觀察,；能夠替換的試劑，盡量換一下,，選用好的試劑,，避免找問(wèn)題麻煩,。脫色液中甲醇的含量太高也會(huì)造成膠縮。
Q: 蛋白質(zhì)的分子量跨度很大,，如要分離小21KD,，中至66KD，大至170KD,，可以一次做好嗎,？
A：這么廣的分布不好轉(zhuǎn)移，一般建議：21kd和66kd可以一起轉(zhuǎn),，12％SDS-PAGE,， 170kd 用7%SDS－PAGE,分開(kāi)轉(zhuǎn)較好。
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