免疫學(xué)三大工具,，IHC、Western blot,、ELISA,，分別用于定位，定性和定量!IHC（免疫組化）
是融合了免疫學(xué)原理（抗原抗體特異性結(jié)合）和組織學(xué)技術(shù)（組織的取材,、固定,、包埋、切片,、脫蠟,、水化等），通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素,、酶,、金屬離子、同位素)顯色,，來對(duì)組織（細(xì)胞）內(nèi)抗原進(jìn)行定位,、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細(xì)胞或組織,，要在顯微鏡下觀察結(jié)果,，可能出現(xiàn)膜陽性、質(zhì)陽性和核陽性,。
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）
用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色,，待測(cè)的樣品多是血清、血漿,、尿液,、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液，因而沒有用到組織包埋,、切片等技術(shù),，這是與免疫組化的主要區(qū)別，操作上開始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面,，從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上,，這就是“吸附”的含義,。
免疫組化和elisa所用到的原理大致相同，只是因?yàn)樗鶛z測(cè)的樣品不同,，從而在操作方法上有所不同,。elisa多用于定量分析，其靈敏度非常高,。
Western bolt （蛋白質(zhì)印跡法）
先要進(jìn)行SDS-PAGE,，然后將分離開的蛋白質(zhì)樣品用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)移到固相載體上，而后利用抗原-抗體-標(biāo)記物顯色來檢測(cè)樣品,，可以用于定性和半定量,。
【1】.對(duì)于IHC來說，定位是免疫組化zui大的優(yōu)勢(shì)
該方法可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位, 因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察,，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,，相比于其他蛋白檢測(cè)方法，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確,、定性靈敏度高,，是定位檢測(cè)分析方法對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開展深入研究是十分有意義，尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用,。
【2】WB與IHC技術(shù)相比,，定量可能更加準(zhǔn)確
當(dāng)然WB也可定性和定位(通過提取膜蛋白或核蛋白,、胞漿蛋白分別檢測(cè)其中抗原含量,，進(jìn)而間接反映它們的定位)，但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于IHC,。
【3】ELISA與IHC相比,，定量zui準(zhǔn)確，是分泌性蛋白檢測(cè)方法之一,。
尤其對(duì)于微定量分析多個(gè)樣本非常有用,，所用試劑和樣品量很少，結(jié)果,。IHC針對(duì)性比較強(qiáng),，而且一般是以組織或者細(xì)胞為樣本，而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液,。免疫組化可以快速檢測(cè)樣本中抗體的陽性或者陰性,，一般不用于定量檢測(cè)。
【4】WB和ELISA的區(qū)別
western blotting：可以看到特異性的條帶,，但是定量比較煩
ELISA：可以直接讀出濃度,，但是如果抗體有非特異性結(jié)合，那得到的數(shù)值就不可信,。
WB：只能半定量,但是可以檢測(cè)細(xì)胞膜蛋白,這點(diǎn)elisa做不到
ELISA：可用定量方法檢測(cè)蛋白,也就是說可以觀察不同濃度刺激物對(duì)目的蛋白的影響
WB：所檢測(cè)的一般是抗原,，而elisa抗原抗體都可以檢測(cè),。
WB：所檢測(cè)的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚體,、降解產(chǎn)物等,，一句話，WB可以確定所用抗體是與哪種蛋白起作用的,；而elisa無能為力,，一鍋端了。
WB：所適用的一抗一般是線性位點(diǎn)的,，elisa線性或構(gòu)象型抗體都可以使用,。從另一個(gè)意義上講，WB可以做抗體是線性位點(diǎn)還是構(gòu)象型位點(diǎn)的補(bǔ)充判定,，而elisa不行,。
WB：一次處理量就是一塊膠版，10-20個(gè)樣品zui多了,。elisa一塊96孔板一次可以處理96個(gè)樣本,，可以設(shè)置多個(gè)復(fù)孔、對(duì)照,、梯度樣等來提高檢測(cè)的可信度,。
WB：操作常見的非特異性條帶，膜本底差,，顯色不好等等缺點(diǎn)在elisa上表現(xiàn)得要好得多,。
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