免疫學(xué)三大工具,，IHC,、Western blot、ELISA,，分別用于定位,，定性和定量!IHC（免疫組化）
是融合了免疫學(xué)原理（抗原抗體特異性結(jié)合）和組織學(xué)技術(shù)（組織的取材、固定,、包埋,、切片、脫蠟,、水化等）,，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶,、金屬離子,、同位素)顯色，來(lái)對(duì)組織（細(xì)胞）內(nèi)抗原進(jìn)行定位,、定性及定量的研究(主要是定位),。樣本是細(xì)胞或組織，要在顯微鏡下觀察結(jié)果,，可能出現(xiàn)膜陽(yáng)性,、質(zhì)陽(yáng)性和核陽(yáng)性。
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）
用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色,，待測(cè)的樣品多是血清,、血漿、尿液,、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液,，因而沒(méi)有用到組織包埋,、切片等技術(shù)，這是與免疫組化的主要區(qū)別,，操作上開(kāi)始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面,，從而使后來(lái)形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上，這就是“吸附”的含義,。
免疫組化和elisa所用到的原理大致相同,，只是因?yàn)樗鶛z測(cè)的樣品不同，從而在操作方法上有所不同,。elisa多用于定量分析,，其靈敏度非常高。
Western bolt （蛋白質(zhì)印跡法）
先要進(jìn)行SDS-PAGE,，然后將分離開(kāi)的蛋白質(zhì)樣品用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)移到固相載體上,，而后利用抗原-抗體-標(biāo)記物顯色來(lái)檢測(cè)樣品，可以用于定性和半定量,。
【1】.對(duì)于IHC來(lái)說(shuō),，定位是免疫組化zui大的優(yōu)勢(shì)
該方法可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位, 因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,，相比于其他蛋白檢測(cè)方法,，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高,，是定位檢測(cè)分析方法對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開(kāi)展深入研究是十分有意義,，尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。
【2】WB與IHC技術(shù)相比,，定量可能更加準(zhǔn)確
當(dāng)然WB也可定性和定位(通過(guò)提取膜蛋白或核蛋白,、胞漿蛋白分別檢測(cè)其中抗原含量，進(jìn)而間接反映它們的定位),，但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于IHC,。
【3】ELISA與IHC相比，定量zui準(zhǔn)確,，是分泌性蛋白檢測(cè)方法之一,。
尤其對(duì)于微定量分析多個(gè)樣本非常有用，所用試劑和樣品量很少,，結(jié)果,。IHC針對(duì)性比較強(qiáng)，而且一般是以組織或者細(xì)胞為樣本,，而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液,。免疫組化可以快速檢測(cè)樣本中抗體的陽(yáng)性或者陰性，一般不用于定量檢測(cè)。
【4】WB和ELISA的區(qū)別
western blotting：可以看到特異性的條帶,，但是定量比較煩
ELISA：可以直接讀出濃度,，但是如果抗體有非特異性結(jié)合，那得到的數(shù)值就不可信,。
WB：只能半定量,但是可以檢測(cè)細(xì)胞膜蛋白,這點(diǎn)elisa做不到
ELISA：可用定量方法檢測(cè)蛋白,也就是說(shuō)可以觀察不同濃度刺激物對(duì)目的蛋白的影響
WB：所檢測(cè)的一般是抗原,，而elisa抗原抗體都可以檢測(cè)。
WB：所檢測(cè)的抗原可以知道其分子量的大小,，或是否是多聚體,、降解產(chǎn)物等，一句話,，WB可以確定所用抗體是與哪種蛋白起作用的；而elisa無(wú)能為力,，一鍋端了,。
WB：所適用的一抗一般是線性位點(diǎn)的，elisa線性或構(gòu)象型抗體都可以使用,。從另一個(gè)意義上講,，WB可以做抗體是線性位點(diǎn)還是構(gòu)象型位點(diǎn)的補(bǔ)充判定，而elisa不行,。
WB：一次處理量就是一塊膠版,，10-20個(gè)樣品zui多了。elisa一塊96孔板一次可以處理96個(gè)樣本,，可以設(shè)置多個(gè)復(fù)孔,、對(duì)照、梯度樣等來(lái)提高檢測(cè)的可信度,。
WB：操作常見(jiàn)的非特異性條帶,，膜本底差，顯色不好等等缺點(diǎn)在elisa上表現(xiàn)得要好得多,。
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