在WB過程中，分子量Marker就像個(gè)螺絲釘一樣,，只是個(gè)小細(xì)節(jié),，然而就是這樣一個(gè)小細(xì)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有著不可忽視的作用。這個(gè)WB參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對(duì)應(yīng)的分子量大小,，只有標(biāo)準(zhǔn)量無誤了,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說服力，除此之外,，蛋白標(biāo)準(zhǔn)還有表示轉(zhuǎn)移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用,，所以選擇正確的蛋白Marker也是WB實(shí)驗(yàn)成功的必要條件之一,。 本篇討論Western Blot實(shí)驗(yàn)中關(guān)于蛋白Marker的常見問題分析,，有助于成功完成WB。
Q：預(yù)染蛋白Marker是什么,？有何用途,？
A：預(yù)染蛋白Marker是一些純化好的蛋白，通過與染料共價(jià)耦聯(lián)后混合而成,。在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以直接觀察到,。預(yù)染蛋白Marker的出現(xiàn)方便了我們的實(shí)驗(yàn)，這種蛋白Marker可以幫助我們?cè)陔娪緯r(shí),、電泳后,，以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測(cè)電泳情況和估計(jì)遷移率——比如，已知垂直電泳*分辨區(qū)域大約在膠的2/3處,，如果使用預(yù)染Marker就可以預(yù)測(cè)目標(biāo)蛋白進(jìn)入*分辨區(qū)時(shí)停止電泳以得到*分辨效果;如果觀察到Marker電泳異常也可以及時(shí)終止電泳;另外在Western Blot轉(zhuǎn)膜以后可以直接觀察蛋白轉(zhuǎn)膜是否*,，還可以在膜上標(biāo)記蛋白分子量。所以越來越受到使用者的熱捧,。
Q：蛋白Marker為什么跑的條帶不清楚,？
A：原因很多哦，首先確認(rèn)膠的濃度,、PH值,，離子強(qiáng)度是不是正常，這些都會(huì)影響條帶的質(zhì)量,。其次確定電泳液的PH,、離子強(qiáng)度是否正確，如甘氨酸濃度太低時(shí),，蛋白會(huì)濃縮不好,；電泳液新鮮配制。
其次，確認(rèn)蛋白Marker是否降解或者染料是否脫落,。absin生產(chǎn)的預(yù)染蛋白Marker采用*的技術(shù),，能保證染料不會(huì)從蛋白上脫落。且經(jīng)過試驗(yàn)證實(shí),，預(yù)染蛋白Marker能在4°C保存3月之久,，而不易降解。
Q：預(yù)染蛋白Marker的種類,？
A：預(yù)染蛋白Marker可以分為兩種：?jiǎn)紊A(yù)染和多色預(yù)染,。Marker條帶越多參考價(jià)值越大，可就越難辨認(rèn)區(qū)分,，如果用不同的顏色來區(qū)別就比較好辨認(rèn)啦,。absin為您提供了含多種染料的預(yù)染Marker，方便您區(qū)分分子量區(qū)間,。其所涵蓋的分子量范圍從10kDa到245kDa,，*日常所需。
Q：為什么預(yù)染蛋白Marker對(duì)分子量的衡量不是很,？
A：預(yù)染蛋白Marker與染料共價(jià)耦聯(lián)，所以在不同的緩沖條件下電泳時(shí)遷移特性可能會(huì)發(fā)生某些變化,，可能導(dǎo)致一些偏差,。不過多數(shù)情況下Marker的條帶未必能和我們的目標(biāo)蛋白*一樣，我們得到的也不過是一種相對(duì)Marker指示的參考大小,，zui后都需要Western來定性,，所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶，預(yù)染Marker還是很好用的,，而且也可以和未染色的蛋白標(biāo)準(zhǔn)一起使用,。另外，absin提供了在常用的電泳緩沖體系下,，預(yù)染蛋白Marker的相對(duì)分子量,，方便使用者對(duì)分子量的預(yù)判。
Q：愛必信廣譜型蛋白預(yù)染marker特點(diǎn)是什么,？
A：
1,、使用方便：可在冷水或熱水中快速溶解，可直接上樣,，無需加熱或煮沸,；
2、與各種膜兼容：彩色條帶在WB中可轉(zhuǎn)移到膜上成像,；
3,、更清晰，更易觀察；
4,、每批次均經(jīng)過SDS-PAGE和WB的驗(yàn)證
5,、足量耐用：一支500ul至少跑100塊8*10cm膠
6、不易降解
Q：愛必信廣譜型蛋白預(yù)染marker實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖,？
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