血清小知識(shí)血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,,其組成成份雖大部分已知,,但還有一部分尚不清楚,而且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e,、年齡,、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白,、多肽,、脂肪、碳水化合物,、生長(zhǎng)因子,、激素、無(wú)機(jī)物等,,其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白,、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷,、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞的起到某些保護(hù)作用。
胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛,。胎牛血清是品質(zhì)zui高的,,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體,、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分zui少,。
保存血清的方法
長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃或-80℃低溫冰箱中,由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,,因此,,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽?。多?shù)情況下一瓶500ml的血清不能夠一次使用完畢,所以建議一次性將血清分裝成一次性能夠使用完畢的體積(如50ml),。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1個(gè)月,。
如何解凍血清
我們建議血清在2-8℃的冰箱過(guò)夜溶解,在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),,使溫度與成分均一,,減少沉淀的發(fā)生,。瓶裝血清解凍應(yīng)采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天;然后移入室溫,,待全部溶解后再分裝,。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀,。
血清中如果出現(xiàn)沉淀
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,,也會(huì)存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,,并不影響血清本身的質(zhì)量。
若欲去除這些絮狀沉淀物,,可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾,。不要以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,,因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過(guò)濾膜。
血清的熱滅活
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞(ES)細(xì)胞,、昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),,推薦使用熱滅活血清。
熱滅活一般是56℃,、30分鐘加熱已*解凍的血清,,加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻。
除非必須,,一般不建議作此熱處理,,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多。
有必要對(duì)血清都進(jìn)行熱滅活嗎,?
實(shí)驗(yàn)顯示,,熱滅活血清對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)過(guò)處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),,或*沒(méi)有任何作用,,甚至可能因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,,造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。經(jīng)過(guò)熱處理的血清,,沉淀物會(huì)顯著地增多,,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)”,,常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增,。因此若非必須,無(wú)需對(duì)血清進(jìn)行熱滅活處理,。
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