原理:
采用雙抗體夾心法測定人雄激素結(jié)合蛋白（ABP）水平,。用純化的人雄激素結(jié)合蛋白（ABP）抗體包被微孔板,，制成固相載體,，實(shí)驗(yàn)時依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品,，并加入 HRP 標(biāo)記的 ABP 抗體,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，反復(fù)洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,，再用硫酸終止反應(yīng),，轉(zhuǎn)變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關(guān),。采用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度（OD 值）,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算測試樣品中 ABP 濃度,。 
實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制：
1. 儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘）,，微量加液器、吸頭,、蒸餾水或去離子水,，濾紙。
2. 緩沖液使用：加5ul 的緩沖液于50ul 的樣品中,，如果樣品量不夠或者不確定,，緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可。
混勻,，靜置1小時備用（如果標(biāo)本是血清或者血漿,，此步驟忽略）。
3. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液備用,。
樣品收集,、處理及保存
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。
2. 細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104
-106
/ml 左右,，通過反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,，或
者細(xì)胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測。
3. 血清：在室溫下,，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘，取上清待測,。
4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘,，收集上
清,。
5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。
6. 組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本,，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS,，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000
rmp離心20 分鐘,，收集上清進(jìn)行檢測,。
7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
8. 保存：如果樣品不能立即檢測,，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
操作步驟：
1. 取出試劑盒,，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 分組：取出 96 孔板,，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)
品組（6 個濃度）,、空白孔,、待測樣品組。
注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差,，保證準(zhǔn)確性,，建議設(shè)置復(fù)孔。
3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中,；空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水,；其余微孔中加入 50ul
的待測樣本。
4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入 100ul 的酶標(biāo)溶液（空白對照孔除外）,。
5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后,，放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時。
6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔,，靜置 15-30s,，充分清洗酶標(biāo)板 5 次，用吸水紙*拍干,。
7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,，再加入顯色劑 B 液 50ul。
8. 終止：25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘,，加入 50ul 終止液,。
9. 讀板：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。
注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,，讀板時間控制在終止反應(yīng)后的 30 分鐘內(nèi),，以免影響準(zhǔn)確性。
注意事項：
1. 實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,，避免交叉污染,。
2. 加樣：加樣時，要控制加樣速度,，避免*孔與后一孔間的時間間隔過大,，否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性,。
3. 孵育：嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進(jìn)行,。
4. 反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深,，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),。
5. 建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高,，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,，計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
6. 建議使用本試劑盒時先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，試用幾個標(biāo)本）,，如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商溝通,，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失,。
安全性
1． 避免人體直接接觸顯色劑A,、B和終止液,。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗,。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要進(jìn)食,、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：2-8℃
2.有效期：6個月