ELISA檢測(cè)試劑盒原理：

采用雙抗體夾心法測(cè)定人雄激素結(jié)合蛋白（ABP）水平,。用純化的人雄激素結(jié)合蛋白（ABP）抗體包被微孔板,，制成固相載體,，實(shí)驗(yàn)時(shí)依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品,，并加入HRP標(biāo)記的ABP抗體,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，反復(fù)洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,，再用硫酸終止反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成黃色,。顏色的深淺和樣品中的ABP含量呈正相關(guān),。采用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度（OD值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算測(cè)試樣品中ABP濃度,。 

elisa檢測(cè)試劑盒RD實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制：

1. 儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘）,，微量加液器、吸頭,、蒸餾水或去離子水,，濾紙。

2. 緩沖液使用：加5ul的緩沖液于50ul的樣品中,，如果樣品量不夠或者不確定,，緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可?；靹颍o置1小時(shí)備用（如果標(biāo)本是血清或者血漿,，此步驟忽略）,。

3. 洗液的配制：按1：100的比例配制洗液備用。

樣品收集,、處理及保存：

1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份,。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。

2. 細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml左右,，通過(guò)反復(fù)凍融,，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測(cè),。

3. 血清：在室溫下，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘,，取上清待測(cè)。

4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合后靜置10-20分鐘后,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。

5. 體液：包括胸腹水,、腦脊液，分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
6. 組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本,，稱(chēng)取重量0.5mg,，加入500ul的PBS，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,，以2000-3000rmp離心20分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè),。

7. 樣品中不能含有NaN3,，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

8. 保存：如果樣品不能立即檢測(cè),，應(yīng)將其分裝,，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中含大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

elisa檢測(cè)試劑盒RD操作步驟：

1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘,。

2. 分組：取出96孔板,，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理,。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）,、空白孔、待測(cè)樣品組,。

注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差,，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔,。

3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中,；空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中加入 50ul的待測(cè)樣本,。

4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組,、待測(cè)樣本組各孔中加入100ul 的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。

5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后,，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí),。

6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿(mǎn)每孔,，靜置15-30s，充分清洗酶標(biāo)板5次,，用吸水紙拍干,。

7. 顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul,。

8. 終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,，加入50ul終止液。

9. 讀板：在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值,。

注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性,。

注意事項(xiàng)：

1. 實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,，避免交叉污染。

2. 加樣：加樣時(shí),，要控制加樣速度,，避免孔與后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。

3. 孵育：嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行,。

4. 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化,，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),。

5. 建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量,，如樣品濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)?jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

6. 建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn),，可和所購(gòu)經(jīng)銷(xiāo)商溝通,，如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換,，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失,。

安全性：

避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液,。一旦接觸到這些液體,，請(qǐng)盡快用水沖洗。

實(shí)驗(yàn)中不要進(jìn)食,、抽煙或使用化妝品,。

不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

保存條件及有效期：

試劑盒保存：2-8℃

有效期：6個(gè)月