產(chǎn)品名稱：腎系膜細(xì)胞*培養(yǎng)基

規(guī)格：100mL/125mL×4
貨號：YS-02X10040

細(xì)胞生長實驗 ：細(xì)胞生長良好,，形態(tài)正常

儲存條件：2℃-8℃,，避光儲存

運輸條件：冰袋冷藏運輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061）,，1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070）,，1%,；雙抗，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

注意事項：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài),，細(xì)胞最好在對數(shù)生長期，細(xì)胞密度適合,，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合,，過密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時不容易分散,；

（2）凍存的密度不宜過低,，10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107）,，一瓶凍一管（1.5ml凍存管）,，10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個細(xì)胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過度,，吹打不可太用力,，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦,，不是加入凍存液再吹打,。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格,，我從10%-90%都用過,，問題不大，個人認(rèn)為10%-20%可以了,，能節(jié)約處就節(jié)約點嘛,！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,，放在4度冰箱預(yù)冷,。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管,。

（5）關(guān)于“慢凍",，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好,，4度2h,，-20度2h或更長，-80度過夜,，最后液氮,。對于條件較好的實驗室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實驗室，推薦使用程序降溫盒,，內(nèi)裝異丙醇,，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便,，省了包棉花,、4度、-20度了,。

使用步驟：

一）準(zhǔn)確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途,，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈,。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),，標(biāo)記劃線，加熱溶解,，補充水分,，測定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi),。

（三）過濾：將玻璃漏斗置鐵架上,，再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明,。

（四）分裝：將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL,；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好,，準(zhǔn)備滅菌,。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法,。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,，但細(xì)菌的芽胞有較強的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的,。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,，即壓力越大，蒸汽溫度就越高,。因此,，在同一溫度條件下,，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好,。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后,，其蛋白質(zhì)易于凝固變性,，因為蒸汽的穿透力強，殺菌效果好,。

細(xì)胞特性：

1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織,。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞免疫熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%,。

4)不含有 HIV-1,、 HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌,。

5)細(xì)胞生長方式：上皮樣,，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng),。
Skp2/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞S相激酶相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor) 腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子)(多肽片斷抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

一氧化氮合成酶-2抗體  NOS-2/iNOS 0.1ml

5-HT/5 Hydroxy Tryptophan 英文名稱： 5羥色胺抗體 0.1ml

EME1 英文名稱： 減數(shù)分裂內(nèi)切酶EME1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-P53(Ser6) 磷酸化抑制基因P53抗體 規(guī)格 0.1ml

BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor) 腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子)(多肽片斷抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

PKB (Rat) 大鼠蛋白激酶BMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

 Phospho-EGFR(Thr669) 磷酸化表皮生長因子受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MyoGEF 肌球蛋白相互作用G蛋白交換因子抗體 規(guī)格 0.2ml

Ig-j(Human immunoglubin joining chain) ELISA Kit 人球蛋白j鏈 96T

SPOP 英文名稱： SPOP蛋白抗體 0.2ml

CCKBR 英文名稱： 促胃泌素受體抗體 0.1ml

 Phospho-EGFR(Thr669) 磷酸化表皮生長因子受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rabbit  horse IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml

FSH receptor 英文名稱： 促卵泡刺受體抗體 0.1ml

囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子抗體  CFTR 0.1ml

 OPGL/RANKL/CD254 /FITC 熒光素標(biāo)記骨保護(hù)蛋白配體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PKC delta 蛋白激酶C亞性D型抗體 規(guī)格 0.2ml

Rabbit  pig IgM/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗豬IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
腎系膜細(xì)胞*培養(yǎng)基HA（抗人；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）100微升人羥基膠原吡啶交聯(lián)（OH-PYD）ELISA試劑盒, OH-PYD ELISA

FLAG（抗人,；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）100微升人環(huán)加氧酶2（COX-2）ELISA試劑盒,COX-2 ELISA

P53（抗人,；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）100微升人白介素1β轉(zhuǎn)換酶（ICE）ELISA試劑盒, ICE ELISA

HIS（抗人,；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）100微升人絲/蘇蛋白磷酸酶（STK）ELISA試劑盒

ACTIN（抗人,；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）100微升人心肌肌凝蛋白輕鏈1（CMLC-1）ELISA試劑盒,

GPDGP（抗人,；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）100微升人分泌型球蛋白A（SIgA）ELISA試劑盒,

抗體－抗試劑專題人補體蛋白4（C4）ELISA試劑盒,

名稱規(guī)格人胸腺五肽（TP-5）ELISA試劑盒,

巨噬細(xì)胞標(biāo)記MAC387抗體100微克人胰島素原（PI）ELISA試劑盒,

?平滑肌SMA抗體100微克人甲狀旁腺素（PTH）ELISA試劑盒,

APC（抗人,；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）100微克小鼠褪黑素（MT）ELISA試劑盒,

CDK2（抗人；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）100微克植物C（VC）ELISA試劑盒,

CDK3（抗人,；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）100微克L-賴鹽酸鹽

CDK4（抗人,；抗兔,；抗小鼠,；抗大鼠）100微克DL-焦谷

CDK6（抗人,；抗兔；抗小鼠,；抗大鼠）100微克甘氨酰-脯氨酰-對對甲磺酸鹽