人白介素4高敏ELISA試劑盒操作步驟

時間：2020/5/14閱讀：250

實驗開始前,，各試劑均應平衡至室溫,；試劑或樣品配制時，均需充分混勻,，并盡量避免起泡,。

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7.溫育：操作同3,。

8.洗滌：操作同5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。

11.測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。

12.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存,。

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