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異尖線蟲(chóng)屬PCR檢測(cè)試劑盒組成及試劑配制:
1,、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2,、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,,25 U/L,,12.5 U/L,6.25 U/L,,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推,。
3,、 樣品稀釋液:1×20ml,。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml,。
5,、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對(duì)原則,;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性,。
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