原代細(xì)胞凍存好了,，接下來(lái)要注意什么問(wèn)題呢?沒(méi)錯(cuò),，就是記得到時(shí)間了，拿出來(lái)復(fù)蘇,。那么,，細(xì)胞復(fù)蘇的過(guò)程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?請(qǐng)看下文：
活力檢查 – 千萬(wàn)不要使用不健康的細(xì)胞,，可能有污染，如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!
形態(tài)檢查 – 檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長(zhǎng)行為,。
凍存細(xì)胞：
補(bǔ)充新的培養(yǎng)液 – 在您開(kāi)始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液,。
在細(xì)胞長(zhǎng)至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞，計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),，用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度 ~5 x106 cells/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類(lèi)型調(diào)整)
凍存液 – 用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,，有不同類(lèi)型的凍存液，根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型選擇zui合適的凍存液:
– 5-10% DMSO – 注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì).
– 5-15% 甘油
– 如果細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng),，應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇,。
在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類(lèi)型，日期,，凍存人等信息,，并保證每?jī)龃婀懿怀^(guò)1.5ml.
程序降溫是保證凍存細(xì)胞活性的關(guān)鍵，使用 Mr. Frosty保證降溫速度為1°-3°C,，置于-80°C冰箱內(nèi)過(guò)夜,，如果沒(méi)有Mr. Frosty裝置，可以使用實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的泡沫盒,、棉花等,。.
放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以zui快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),，因此,，此步驟使用干冰，或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi),。此外還要注意,，在凍存管上沒(méi)有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息，做好記錄是非常非常重要的!
還有一個(gè)zui重要的,，一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,，以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問(wèn)題!
細(xì)胞復(fù)蘇-正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要，熟記以下要點(diǎn)：
當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出原代細(xì)胞時(shí),，有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,，使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要從液氮內(nèi)轉(zhuǎn)移凍存管至熱的容器內(nèi)，應(yīng)在液氮內(nèi)完成
應(yīng)該與37℃水浴中快速溶解凍存的細(xì)胞,，并保證凍存管蓋子在水面之上以避免污染,。當(dāng)zui小的冰塊溶解后，用70%酒精擦拭凍存管,，并迅速轉(zhuǎn)移至新的已經(jīng)預(yù)熱的培養(yǎng)基內(nèi),。
觀察細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)和生長(zhǎng)比率。
其實(shí),，細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn),，不過(guò)這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),，不然，也不一定會(huì)盡如人意,。例如說(shuō),，人身健康方面：一定要記得做好防凍工作，戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等,。
BRCA1  乳腺癌易感基因1抗原    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    規(guī)格:     0.5mg
PSD-95   突觸后密度蛋白95（抗原）    現(xiàn)貨供應(yīng)    規(guī)格:     0.5mg
BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2)  乳腺癌易感基因2抗原    *    規(guī)格:     0.5mg
PTP-1B (Protein-tyrosine phosphatase, non-receptor )  蛋白酪氨酸磷酸酶-1B（抗原）    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    規(guī)格:     0.5mg
RAR-Alpha (Retinoic acid -R-Alpha)  維甲酸受體-α 多肽    現(xiàn)貨供應(yīng)    規(guī)格:     0.5mg
glycoprotein (E1 glycoprotein) [Rubella virus]  風(fēng)疹病毒糖蛋白多肽片段    *    規(guī)格:     0.5mg
原代細(xì)胞