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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)成纖維細(xì)胞排除法
腫瘤細(xì)胞刮除法:
是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭(用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲),、或裹少許脫脂棉制成,,裝入試管中高壓滅菌后備用(也可用特制電熱燒灼器刮除)。刮除程序?yàn)椋?br />(1)標(biāo)記:鏡下觀察,,用不脫色筆在培養(yǎng)瓶皿的背面圈下生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的部位,;
(2)刮除:棄掉培養(yǎng)液,把無菌膠刮伸入瓶皿中,,肉眼或顯微鏡窺視下,,刮除無標(biāo)記空間;
(3)用Hanks液沖洗一兩次,,洗除被刮掉的細(xì)胞,;
(4)注入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)仍有成纖維細(xì)胞殘留,,可重復(fù)刮除至*除掉為止
2.反復(fù)貼壁法:
根據(jù)腫瘤細(xì)胞比成纖維細(xì)胞貼壁速度慢的特點(diǎn),,并結(jié)合使用不加血清的營(yíng)養(yǎng)液,把含有兩類細(xì)胞的細(xì)胞懸液反復(fù)貼壁,,使兩類細(xì)胞相互分離,,操作方法與傳代相同。
(1)待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)一定數(shù)量后,,倒出舊培養(yǎng)液,,用胰酶消化后,Hanks 沖洗2次,,加入不含血清的培養(yǎng)液,,吹打制成細(xì)胞懸液;
(2)取編號(hào)為此A,、B,、C三個(gè)培養(yǎng)瓶;首先把懸液接種入A培養(yǎng)瓶中,。置溫箱中靜止培養(yǎng)5~20分鐘后,,輕輕傾斜培養(yǎng)瓶,讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養(yǎng)液,,再接種入B培養(yǎng)瓶中后,;向A瓶中補(bǔ)充少許*培養(yǎng)液置溫箱中繼續(xù)培養(yǎng);
(4)培養(yǎng)B瓶中細(xì)胞5~20分鐘后,,接處理A的方法,,把培養(yǎng)液注入C培養(yǎng)瓶中;再向B瓶中補(bǔ)加*培養(yǎng)基,。
當(dāng)三個(gè)瓶?jī)?nèi)都含有培養(yǎng)液后,,均在溫箱中繼續(xù)培養(yǎng),。如操作成功,次日觀察可見A瓶主要為成纖維細(xì)胞,,B瓶?jī)深惣?xì)胞相雜,,C瓶可能主要為癌細(xì)胞。必要時(shí)可反復(fù)處理多次,,直至癌細(xì)胞純化為止,。
3.消化排除法:
此法曾用于乳癌細(xì)胞的培養(yǎng),具體程序是:
(1)先是用0.5%胰蛋白酶和0.02%EDTA(1:1)混合液漂洗培養(yǎng)細(xì)胞一次,,然后再換成新的混合液繼續(xù)消化,,并在倒置顯微鏡下窺視和不時(shí)搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,到半數(shù)細(xì)胞脫落下來后,,便立即停止消化,;
(2)把消化液吸入離心管中,離心去上清,,吸入另瓶中,,加培養(yǎng)液置溫箱中培養(yǎng);向原瓶?jī)?nèi)也補(bǔ)加新的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),。用此法處理后,,成纖維細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞易先脫落。經(jīng)過幾次反復(fù)處理,,可能把成纖維細(xì)胞除凈,。
4.膠原酶消化法:
本法是利用成腫瘤細(xì)胞對(duì)膠原酶較為敏感的特點(diǎn),通過消化進(jìn)行選擇,。
(1)可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理,邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視,,當(dāng)發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞被除掉后,,即終止消化;
(2)用Hanks洗滌處理一次后,,更換新培養(yǎng)液,,繼續(xù)培養(yǎng),可獲純凈腫瘤細(xì)胞,。如成纖維細(xì)胞未被除凈,,可再次重復(fù)。
5.其它方法:
有人發(fā)現(xiàn)聚丙烯酰胺有抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,;也有人用聚蔗糖制備成比重1.025~1.085的密度梯度離心液,,加入細(xì)胞懸液后,在23℃中800g離心 10分種,。在比重1.025~1.050層為成纖維細(xì)胞,,在比重1.050~1.085層為上皮細(xì)胞,,再經(jīng)過分離進(jìn)行培養(yǎng)。zui近也有人應(yīng)用特殊化學(xué)物如SOD抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的方法,。
選用上述任何一種方法,,都需進(jìn)行試驗(yàn),取得必要經(jīng)驗(yàn),,找出適合的條件,,才能獲得好的效果。
Anti-HIV gp120 規(guī)格: 規(guī)格: 0.2ml 產(chǎn)品名稱: 艾滋病病毒抗體
Anti-HIV-1 規(guī)格: 規(guī)格: 0.1ml 產(chǎn)品名稱: 艾滋病病毒-1/人類免疫缺陷病毒1型抗體
Anti-HLA-DR 規(guī)格: 規(guī)格: 0.1ml 產(chǎn)品名稱: HLA-DR抗原抗體
Anti-HLA-G 規(guī)格: 規(guī)格: 0.1ml 產(chǎn)品名稱: 人類白細(xì)胞抗原G/組織相容性白細(xì)胞抗原G抗體
腫瘤細(xì)胞
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