許多原代細(xì)胞系容易適應(yīng)無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基,，而對(duì)環(huán)境要求過高的其它細(xì)胞卻難以適應(yīng)變化,，這就需要更為專業(yè)的方法來適應(yīng)變化。而根據(jù)細(xì)胞系的特性,，有兩種方法可使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基,。*種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法；另一種方法是直接適應(yīng),。
一,、連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法
*種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法。通過一系列的血清還原步驟，使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基,。這是優(yōu)先選用的方法,，且不對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境形成太過惡劣的變化。
連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法——方法1
使原培養(yǎng)基內(nèi)的細(xì)胞連續(xù)地經(jīng)過以下幾個(gè)階段：
階段1：75%補(bǔ)加血清的培養(yǎng)基或25%無血清培養(yǎng)基
階段2：50%補(bǔ)加血清的培養(yǎng)基或50%無血清培養(yǎng)基
階段3：25%補(bǔ)加血清的培養(yǎng)基或75%無血清培養(yǎng)基
階段4:100%無血清培養(yǎng)基

連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法——方法2
1,、以原培養(yǎng)基中的相同濃度,，將血清加入無血清培養(yǎng)基內(nèi)。將細(xì)胞從含血清的原培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到加了血清的無血清培養(yǎng)基,，此時(shí)應(yīng)注意要提培養(yǎng)系統(tǒng)中的細(xì)胞密度,。讓細(xì)胞有一個(gè)適應(yīng)過渡期。
2,、按照方法1,，緩慢地降低血清濃度，使細(xì)胞在每個(gè)階段有適應(yīng)的時(shí)間,。
3,、一旦血清補(bǔ)加量降為0，在用于進(jìn)行分析或其他操作前,，讓細(xì)胞培養(yǎng)物具有數(shù)個(gè)適應(yīng)過渡期,。
二、直接適應(yīng)法
另一種方法是直接適應(yīng),。其中,，原代細(xì)胞直接從含血清培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到無血清培養(yǎng)基內(nèi)。將大量細(xì)胞直接轉(zhuǎn)移到無血清或無蛋白的新培養(yǎng)基內(nèi),。細(xì)胞必須處于指數(shù)生長(zhǎng)期中期,，且存活率>90%。
每3到4天更換約50%的培養(yǎng)基,，以防止培養(yǎng)基變成酸性,。維持高于正常值的細(xì)胞培養(yǎng)密度，直至培養(yǎng)的細(xì)胞需要每日更換培養(yǎng)基,。這時(shí),，將細(xì)胞擴(kuò)增到多個(gè)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
考慮建議
請(qǐng)?jiān)谶m應(yīng)過程中,，細(xì)胞通常對(duì)PH和溫度變化較為敏感,。讓細(xì)胞在每個(gè)階段都至少有一個(gè)適應(yīng)過渡期。
細(xì)胞存活率和細(xì)胞密度
細(xì)胞在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中期快速分裂,，且在適應(yīng)過程開始時(shí),，存活率大于90%。這一點(diǎn)至關(guān)重要,。當(dāng)細(xì)胞需傳代時(shí),，建議采用1:2或1:3的小傳代比例,，以維持更高的細(xì)胞密度，同時(shí)提供隔絕期間可能有助于細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)因子,。當(dāng)細(xì)胞適應(yīng)新的培養(yǎng)條件時(shí),，在增大細(xì)胞傳代密度。
細(xì)胞生長(zhǎng)
如果在適應(yīng)過程中,，細(xì)胞停止了生長(zhǎng),，則需讓細(xì)胞有更多的時(shí)間來適應(yīng)培養(yǎng)基組合。例如,，在方法1的階段4,，向無血清培養(yǎng)基添加少量的血清(1-3%)。這樣有助于細(xì)胞更容易地適應(yīng)新的培養(yǎng)基,。然后，在幾個(gè)過渡期內(nèi),，緩慢地減少血清量,，直至學(xué)清量為0。
懸浮培養(yǎng)物
Meiatech公司的無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基不含血清中所發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞附著延伸影子,。在一段過渡期內(nèi),，貼壁細(xì)胞將開始離開表面，并成為懸浮細(xì)胞系開始生長(zhǎng),。細(xì)胞也可能因適應(yīng)而發(fā)生形態(tài)變化,。監(jiān)測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，只要細(xì)胞能夠與新系統(tǒng)相融合,，任何形態(tài)變化都不重要,。
細(xì)胞叢
在適應(yīng)于無血清培養(yǎng)期間，細(xì)胞容易形成叢,。傳代培養(yǎng)時(shí),，將叢輕輕折斷，使其分散開,。將培養(yǎng)物從靜止細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)移到可旋轉(zhuǎn)錐形瓶?jī)?nèi),，這樣可能會(huì)有助于防止細(xì)胞叢的形成。
抗生素
由于血清蛋白易于粘合到抗生素上,，因此,，不建議在無血清適應(yīng)過程中使用抗生素。如不存在血清蛋白,，則抗生素水平可能會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性,。
預(yù)防措施
確保在開始適應(yīng)過程前，儲(chǔ)存有大量原培養(yǎng)基的細(xì)胞,。如果原代細(xì)胞沒有存活到下一階段,，則在整個(gè)過程中保存每一階段使用的培養(yǎng)瓶,。