許多原代細胞系容易適應無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基,，而對環(huán)境要求過高的其它細胞卻難以適應變化，這就需要更為專業(yè)的方法來適應變化,。而根據(jù)細胞系的特性,，有兩種方法可使細胞適應無血清培養(yǎng)基。*種方法是連續(xù)適應/循序隔絕法,；另一種方法是直接適應,。
一、連續(xù)適應/循序隔絕法
*種方法是連續(xù)適應/循序隔絕法,。通過一系列的血清還原步驟,，使細胞適應無血清培養(yǎng)基。這是優(yōu)先選用的方法,，且不對細胞培養(yǎng)環(huán)境形成太過惡劣的變化,。
連續(xù)適應/循序隔絕法——方法1
使原培養(yǎng)基內(nèi)的細胞連續(xù)地經(jīng)過以下幾個階段：
階段1：75%補加血清的培養(yǎng)基或25%無血清培養(yǎng)基
階段2：50%補加血清的培養(yǎng)基或50%無血清培養(yǎng)基
階段3：25%補加血清的培養(yǎng)基或75%無血清培養(yǎng)基
階段4:100%無血清培養(yǎng)基

連續(xù)適應/循序隔絕法——方法2
1、以原培養(yǎng)基中的相同濃度,，將血清加入無血清培養(yǎng)基內(nèi),。將細胞從含血清的原培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到加了血清的無血清培養(yǎng)基，此時應注意要提培養(yǎng)系統(tǒng)中的細胞密度。讓細胞有一個適應過渡期,。
2,、按照方法1，緩慢地降低血清濃度,，使細胞在每個階段有適應的時間,。
3、一旦血清補加量降為0,，在用于進行分析或其他操作前,，讓細胞培養(yǎng)物具有數(shù)個適應過渡期。
二,、直接適應法
另一種方法是直接適應,。其中，原代細胞直接從含血清培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到無血清培養(yǎng)基內(nèi),。將大量細胞直接轉(zhuǎn)移到無血清或無蛋白的新培養(yǎng)基內(nèi),。細胞必須處于指數(shù)生長期中期，且存活率>90%,。
每3到4天更換約50%的培養(yǎng)基,，以防止培養(yǎng)基變成酸性。維持高于正常值的細胞培養(yǎng)密度,，直至培養(yǎng)的細胞需要每日更換培養(yǎng)基,。這時，將細胞擴增到多個培養(yǎng)瓶內(nèi),。
考慮建議
請在適應過程中,，細胞通常對PH和溫度變化較為敏感。讓細胞在每個階段都至少有一個適應過渡期,。
細胞存活率和細胞密度
細胞在對數(shù)生長期中期快速分裂,，且在適應過程開始時，存活率大于90%,。這一點至關(guān)重要,。當細胞需傳代時，建議采用1:2或1:3的小傳代比例,，以維持更高的細胞密度,，同時提供隔絕期間可能有助于細胞的細胞生長因子。當細胞適應新的培養(yǎng)條件時,，在增大細胞傳代密度,。
細胞生長
如果在適應過程中，細胞停止了生長,，則需讓細胞有更多的時間來適應培養(yǎng)基組合,。例如,，在方法1的階段4，向無血清培養(yǎng)基添加少量的血清(1-3%),。這樣有助于細胞更容易地適應新的培養(yǎng)基,。然后，在幾個過渡期內(nèi),，緩慢地減少血清量,，直至學清量為0,。
懸浮培養(yǎng)物
Meiatech公司的無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基不含血清中所發(fā)現(xiàn)的細胞附著延伸影子,。在一段過渡期內(nèi)，貼壁細胞將開始離開表面,，并成為懸浮細胞系開始生長,。細胞也可能因適應而發(fā)生形態(tài)變化。監(jiān)測細胞的生長速度,，只要細胞能夠與新系統(tǒng)相融合,，任何形態(tài)變化都不重要。
細胞叢
在適應于無血清培養(yǎng)期間,，細胞容易形成叢,。傳代培養(yǎng)時，將叢輕輕折斷,，使其分散開,。將培養(yǎng)物從靜止細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)轉(zhuǎn)移到可旋轉(zhuǎn)錐形瓶內(nèi)，這樣可能會有助于防止細胞叢的形成,。
抗生素
由于血清蛋白易于粘合到抗生素上,，因此，不建議在無血清適應過程中使用抗生素,。如不存在血清蛋白,，則抗生素水平可能會對細胞產(chǎn)生毒性。
預防措施
確保在開始適應過程前,，儲存有大量原培養(yǎng)基的細胞,。如果原代細胞沒有存活到下一階段，則在整個過程中保存每一階段使用的培養(yǎng)瓶,。