1.原代細(xì)胞機(jī)械刮除法：

是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭(用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲),、或裹少許脫脂棉制成,，裝入試管中高壓滅菌后備用(也可用特制電熱燒灼器刮除)。刮除程序?yàn)椋?/p>

(1)標(biāo)記：鏡下觀察,，用不脫色筆在培養(yǎng)瓶皿的背面圈下生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的部位;

(2)刮除：棄掉培養(yǎng)液,，把無(wú)菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下,，刮除無(wú)標(biāo)記空間;

(3)用Hanks液沖洗一兩次,，洗除被刮掉的細(xì)胞;

(4)注入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)仍有成纖維細(xì)胞殘留，可重復(fù)刮除至*除掉為止

2.反復(fù)貼壁法：

根據(jù)腫瘤細(xì)胞比成纖維細(xì)胞貼壁速度慢的特點(diǎn),，并結(jié)合使用不加血清的營(yíng)養(yǎng)液,，把含有兩類(lèi)細(xì)胞的細(xì)胞懸液反復(fù)貼壁，使兩類(lèi)細(xì)胞相互分離,，操作方法與傳代相同,。

(1)待原代細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)一定數(shù)量后，倒出舊培養(yǎng)液,，用胰酶消化后,，Hanks 沖洗2次，加入不含血清的培養(yǎng)液,，吹打制成細(xì)胞懸液;

(2)取編號(hào)為此A,、B、C三個(gè)培養(yǎng)瓶;首先把懸液接種入A培養(yǎng)瓶中,。置溫箱中靜止培養(yǎng)5～20分鐘后,，輕輕傾斜培養(yǎng)瓶，讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養(yǎng)液,，再接種入B培養(yǎng)瓶中后;向A瓶中補(bǔ)充少許*培養(yǎng)液置溫箱中繼續(xù)培養(yǎng);

(3)培養(yǎng)B瓶中細(xì)胞5～20分鐘后,，接處理A的方法，把培養(yǎng)液注入C培養(yǎng)瓶中;再向B瓶中補(bǔ)加*培養(yǎng)基,。

當(dāng)三個(gè)瓶?jī)?nèi)都含有培養(yǎng)液后,，均在溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。如操作成功,，次日觀察可見(jiàn)A瓶主要為成纖維細(xì)胞,，B瓶?jī)深?lèi)細(xì)胞相雜，C瓶可能主要為癌細(xì)胞,。必要時(shí)可反復(fù)處理多次,，直至癌細(xì)胞純化為止。

3.消化排除法：

此法曾用于乳癌細(xì)胞的培養(yǎng),，具體程序是：

(1)先是用0.5%胰蛋白酶和0.02%EDTA(1：1)混合液漂洗培養(yǎng)細(xì)胞一次,，然后再換成新的混合液繼續(xù)消化，并在倒置顯微鏡下窺視和不時(shí)搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,，到半數(shù)細(xì)胞脫落下來(lái)后,，便立即停止消化;

(2)把消化液吸入離心管中，離心去上清,，吸入另瓶中,，加培養(yǎng)液置溫箱中培養(yǎng);向原瓶?jī)?nèi)也補(bǔ)加新的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。用此法處理后,，成纖維細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞易先脫落,。經(jīng)過(guò)幾次反復(fù)處理,，可能把成纖維細(xì)胞除凈。

4.膠原酶消化法：

本法是利用成纖維細(xì)胞對(duì)膠原酶較為敏感的特點(diǎn),，通過(guò)消化進(jìn)行選擇,。

(1)可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理，邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視,，當(dāng)發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞被除掉后,，即終止消化;

(2)用Hanks洗滌處理一次后，更換新培養(yǎng)液,，繼續(xù)培養(yǎng),，可獲純凈腫瘤細(xì)胞。如成纖維細(xì)胞未被除凈,，可再次重復(fù),。

5.其它方法：

有人發(fā)現(xiàn)聚丙烯酰胺有抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的作用;也有人用聚蔗糖制備成比重1.025～1.085的密度梯度離心液，加入細(xì)胞懸液后,，在23℃中800g離心 10分種,。在比重1.025～1.050層為成纖維細(xì)胞，在比重1.050～1.085層為上皮細(xì)胞,，再經(jīng)過(guò)分離進(jìn)行培養(yǎng),。zui近也有人應(yīng)用特殊化學(xué)物如SOD抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的方法。

選用上述任何一種方法,，都需進(jìn)行試驗(yàn),，取得必要經(jīng)驗(yàn)，找出適合的條件,，原代細(xì)胞才能獲得好的效果。