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原代細(xì)胞HEPES緩沖液的使用方法及配制

時(shí)間：2017/1/12閱讀：1237
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原代細(xì)胞HEPES緩沖液的使用方法及配制

(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中,，再過(guò)濾除菌,。每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES,，待溶后用lN NaOH 調(diào)pH至7.2,，濾過(guò)除菌后使用,。原代細(xì)胞此時(shí)HEPES的使用濃度為10 mmol/L,。

(2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L)，使用前取 99ml培養(yǎng)液加入 lml貯存液,，zui終應(yīng)用濃度仍為10mmol/L,。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml雙蒸水中,，用lN NaOH調(diào)pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml,，過(guò)濾除菌,，分裝小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存,。

需要注意的是,，HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L，對(duì)原代細(xì)胞無(wú)毒性作用,。一般情況下,，濃度為20mmol/L的HEPES即可達(dá)到緩沖能力。

一,、加少量鹽的HEPES Buffer配方(500ml)

HEPES 6.5g,、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g,、用0.5M NaOH 水溶液調(diào)節(jié)pH值,，zui后定容。

二,、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸餾水中,，加0.5~1M 的NaOH水溶液調(diào)節(jié)至少所需pH(HEPES的有效pH 范圍是6.8~8.2)，然后用蒸餾水定容至500ml,，于4攝氏度保存,。

三、2×HEPES緩沖鹽溶液的配制

將1.6g NaCl,、0.074g KCl,、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸餾水,，原代細(xì)胞用0.5M NaOH調(diào)節(jié)至所需pH值,，再用蒸餾水定容至100ml即可。

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