培養(yǎng)原代細(xì)胞無菌操作注意事項(xiàng)

1,、操作

原代細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí),，動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，但又不必太快,，以防空氣流動(dòng),，增加污染機(jī)會(huì)。不能用手觸及已消毒器皿,，如已接觸,，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。為拿取方便,，工作臺(tái)面上的用品要有合理的布局,，原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于中央,。工作由始至終要保持一定順序性,，組織或細(xì)胞在未做處理之前，勿過早暴露在空氣中,。同樣,，培養(yǎng)液在未用前，手或相對(duì)較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上方,，瓶口zui易污染,，加液時(shí)如吸管尖碰到瓶口，則應(yīng)將吸管丟掉,。

2,、操作野消毒

無菌培養(yǎng)室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面—次（拖布要）．紫外線照射消毒30-50min，超凈工作臺(tái)臺(tái)面每次實(shí)驗(yàn)前要用75％酒精擦洗,。然后紫外線淌毒30min,。原代細(xì)胞在工作臺(tái)面消毒時(shí)切勿將培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)用液同時(shí)照射紫外線,，消毒時(shí)工作臺(tái)面上用品不要過多或重疊放置．否則會(huì)遮擋射線降低消毒效果,。—些操作用具如移液器、廢液缸,、污物盒,、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺(tái)內(nèi)同時(shí)紫外線消毒。

3,、培養(yǎng)前準(zhǔn)備

在開始實(shí)驗(yàn)前要制定好實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和操作程序,。有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算要事先做好。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,，準(zhǔn)備各種所需器材和物品,，然后開始消毒。這可以避免開始實(shí)驗(yàn)后因物品不全往返拿取而增加污染機(jī)會(huì),。

4,、火焰消毒

在無菌環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)或做其它無菌工作時(shí)，首先要點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈,。以后一切操作,，如按裝吸管帽、打開或封閉瓶口等,，都需在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行,。但要注意：金屬器械不能在為焰中燒的時(shí)間過長，以防退火,，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織,，以免造成組織損傷。再用時(shí)會(huì)把有害物帶入營養(yǎng)液中。開啟,、關(guān)閉長有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時(shí),，火焰滅菌時(shí)間要短。防止因溫度過高燒死細(xì)胞,。另外膠塞過火焰時(shí)也不能時(shí)間長,，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞,。

5,、洗手和著裝

原代細(xì)胞原則上和外科手術(shù)相同。平時(shí)僅做觀察不做培養(yǎng)操作時(shí),，可穿裝細(xì)胞培養(yǎng)室內(nèi)紫外線照射30min的清潔工作服,。在利用超凈臺(tái)工作時(shí)，因整個(gè)前臂要伸入箱內(nèi),，應(yīng)著長袖的清潔工作服,，并于開始操作前要用75％酒精消毒手。如果實(shí)驗(yàn)過程中手觸及可能污染的物品和出入培養(yǎng)室都要重新用消毒液洗手,。進(jìn)入原代培養(yǎng)室需*洗手還要戴口罩,、著消毒衣帽。