培養(yǎng)原代細(xì)胞無菌操作注意事項(xiàng)

1,、操作

原代細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時，動作要準(zhǔn)確敏捷,，但又不必太快,，以防空氣流動，增加污染機(jī)會,。不能用手觸及已消毒器皿,，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換,。為拿取方便,，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在右側(cè),，左手用品在左側(cè),，酒精燈置于中央。工作由始至終要保持一定順序性,，組織或細(xì)胞在未做處理之前,，勿過早暴露在空氣中。同樣,，培養(yǎng)液在未用前,，手或相對較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上方，瓶口zui易污染,，加液時如吸管尖碰到瓶口,，則應(yīng)將吸管丟掉。

2,、操作野消毒

無菌培養(yǎng)室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面—次（拖布要）．紫外線照射消毒30-50min,，超凈工作臺臺面每次實(shí)驗(yàn)前要用75％酒精擦洗。然后紫外線淌毒30min,。原代細(xì)胞在工作臺面消毒時切勿將培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)用液同時照射紫外線,，消毒時工作臺面上用品不要過多或重疊放置．否則會遮擋射線降低消毒效果,。—些操作用具如移液器、廢液缸,、污物盒,、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺內(nèi)同時紫外線消毒。

3,、培養(yǎng)前準(zhǔn)備

在開始實(shí)驗(yàn)前要制定好實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和操作程序,。有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算要事先做好。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,，準(zhǔn)備各種所需器材和物品,，然后開始消毒。這可以避免開始實(shí)驗(yàn)后因物品不全往返拿取而增加污染機(jī)會,。

4,、火焰消毒

在無菌環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)或做其它無菌工作時，首先要點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈,。以后一切操作,，如按裝吸管帽、打開或封閉瓶口等,，都需在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行,。但要注意：金屬器械不能在為焰中燒的時間過長，以防退火,，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織,，以免造成組織損傷。再用時會把有害物帶入營養(yǎng)液中,。開啟,、關(guān)閉長有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時，火焰滅菌時間要短,。防止因溫度過高燒死細(xì)胞,。另外膠塞過火焰時也不能時間長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體,，危害培養(yǎng)細(xì)胞,。

5、洗手和著裝

原代細(xì)胞原則上和外科手術(shù)相同,。平時僅做觀察不做培養(yǎng)操作時,，可穿裝細(xì)胞培養(yǎng)室內(nèi)紫外線照射30min的清潔工作服。在利用超凈臺工作時,，因整個前臂要伸入箱內(nèi),，應(yīng)著長袖的清潔工作服，并于開始操作前要用75％酒精消毒手,。如果實(shí)驗(yàn)過程中手觸及可能污染的物品和出入培養(yǎng)室都要重新用消毒液洗手,。進(jìn)入原代培養(yǎng)室需*洗手還要戴口罩,、著消毒衣帽。