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細(xì)胞系活性檢測方法之乳酸脫氫酶(LDH)釋放法
LDH是活細(xì)胞漿內(nèi)酶,,當(dāng)細(xì)胞損傷,,細(xì)胞膜通透性變化時,,會將LDH釋放到培養(yǎng)液中,。因此培養(yǎng)液中該酶的活性與被裂解的細(xì)胞系數(shù)量成正比,。由LDH催化的酶促反應(yīng)在催化乳酸生成丙酮酸的過程中使氧化型輔酶I(NAD)變成還原型輔酶I(NADH+H),后者再通過遞氫體一吩嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)還原碘硝基氯化四氯唑(INT),,INT接受氫離子被還原成紫紅色的化合物,,酶標(biāo)儀檢測其OD值。與結(jié)晶紫染色法和MTT比色法進(jìn)行靈敏度,、重復(fù)性和相關(guān)性比較,,該法簡便,靈敏度高,,敏感性,、客觀性、試劑成本及測定速度等都要優(yōu)于結(jié)晶紫染色法和MTT比色法,。
LDH法常用于NK細(xì)胞系,、CTL細(xì)胞活性檢測,從而評價機(jī)體免疫功能,;與免疫常用方法Cr釋放法相比,,操作省時和不存在同位素污染等優(yōu)點,引起人們很大興趣,。但此法影響因素較多,,諸如培養(yǎng)基、pH值,、溫度及加底物顯色時間和終止劑等,,實際操作不易掌握。
類似以上通過檢測細(xì)胞內(nèi)酶活性的變化從而間接判斷細(xì)胞活性的方法還有很多,,如酸性磷酸酶法(Acid phosphatasi assay,,APA),利用酯酶的熒光素雙醋酸酯(FDA)法等,。
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