商品介紹：
順烏頭酸酶（aconitase），三羧酸循環(huán)中的酶,，催化檸檬酸轉(zhuǎn)變?yōu)楫悪幟仕?。檸檬酸本身不易氧化,，在順烏頭酸酶作用下,，通過脫水與加水反應(yīng),，使羥基由β碳原子轉(zhuǎn)移到α碳原子上,，生成易于脫氫氧化的異檸檬酸，為進一步的氧化脫羧反應(yīng)作準(zhǔn)備,。

測定原理

ACO催化檸檬酸轉(zhuǎn)化成異檸檬酸,，異檸檬酸氧化脫羧將NAD+ 還原生成NADH,，導(dǎo)致340nm處光吸收上升,。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計,、水浴鍋,、臺式離心機,、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿,、研缽、冰和蒸餾水,。

產(chǎn)品名稱：順烏頭酸酶(ACO)紫外分光光度法測試盒
規(guī)格 : 50管/50樣
測試方法: 紫外分光光度法
貨號：GOY-01S6591
分類：三羧酸循環(huán)系列

試劑的組成和配制
提取液一：液體50mL×1瓶,，4℃保存。
提取液二：液體50mL×1瓶,，4℃保存,。
試劑一：粉劑×1瓶,，-20℃保存,；臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,，用不完的試劑4℃保存,；
試劑二：液體18μL×1瓶,，4℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,，用不完的試劑4℃保存,；
試劑三：粉劑×1瓶,，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,，用不完的試劑4℃保存；
試劑四：液體50mL×1瓶,， 4℃保存,；
測定步驟
1,、 分光光度計預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至340nm,，蒸餾水調(diào)零。
2,、 將試劑一,、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3,、 加樣表：

樣本的前處理
①總FBP酶提取：建議稱取約0.1g樣本,，加入1mL提取液一,，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W,，破碎3s,，間歇7s，總時間1min）,，然后4℃,，8000g離心10min，取上清測定,。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本,，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃,，200g離心5min,，棄沉淀，取上清在4℃,，8000g離心10min,，取上清用于測定胞漿FBP酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴,，200W,，破碎3s，間歇7s,，總時間1min）,，然后4℃，8000g離心10min,，取上清測定葉綠體中FBP酶活性,。
建議測定總FBP酶活性，按照步驟①提取粗酶液,，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,，則按照步驟②提取粗酶液。
FBP活性計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位,。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位,。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L,；ε：NADPH摩爾消光系數(shù),，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑,，1cm,；V樣：加入樣本體積，0.1 mL,；V樣總：加入提取液體積,，1mL；T：反應(yīng)時間,，5 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g。
【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用,，不得用于人體臨床直接檢測,。避免給您帶來不必要的損失，請仔細閱讀購買說明,！
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