詳細(xì)介紹
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測,。避免給您帶來不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱:甲基檸檬酸合酶(MCS)微量法測試盒
規(guī)格 : 100管/96樣
測試方法: 微量法
貨號(hào):GOY-01S6586
分類:三羧酸循環(huán)系列
商品介紹:
MCS廣泛存在于動(dòng)物,、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,,與檸檬酸合酶(CS)共同參與三羧酸循環(huán)的調(diào)節(jié),。
測定原理:
MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生甲基檸檬酰,進(jìn)一步水解產(chǎn)生甲基檸檬酸,;該反應(yīng)促使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,,在 412nm處有特征吸光值。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì),、臺(tái)式離心機(jī),、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、1mL玻璃比色皿,、研缽、冰,、無水乙醇和蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,,4℃保存,。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存,;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,,4℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存,;
試劑三:粉劑×1瓶,,-20℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存,;
試劑四:液體50mL×1瓶,, 4℃保存;
測定步驟
1,、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零,。
2,、 將試劑一、二,、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘,。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,,200W,破碎3s,,間歇7s,,總時(shí)間1min),然后4℃,,8000g離心10min,,取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一),,冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,,棄沉淀,,取上清在4℃,8000g離心10min,,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,,200W,,破碎3s,間歇7s,,總時(shí)間1min),,然后4℃,,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中FBP酶活性,。
建議測定總FBP酶活性,,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,,則按照步驟②提取粗酶液,。
EMSY蛋白抗體 膜粘連蛋白9抗體
延伸突觸蛋白1抗體 膜粘連蛋白8抗體
延伸突觸蛋白2抗體 膜粘連蛋白7抗體
核苷酸內(nèi)焦0酸酶/0酸二酯酶1抗體 膜粘連蛋白6抗體
轉(zhuǎn)錄因子Ets差異基因5抗體 膜粘連蛋白5抗體
雞過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA elisa分析檢測試劑盒
雞核因子-κB(NF-κB)elisa分析檢測試劑盒
雞核因子κB受體活化因子(RANK)elisa分析檢測試劑盒
雞環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)elisa分析檢測試劑盒
姬姆薩染色試劑盒700ml
甲基檸檬酸合酶(MCS)微量法測試盒多頭霉 小金色鏈霉菌 Streptomyces microaureus
蘇云金芽胞桿菌蠟螟亞種 Bacillus thuringiensis subsp. galleriae 蘇云金芽胞桿菌庫爾斯塔克亞種 Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki
產(chǎn)黃青霉 斑褶菇
杏鮑菇 戴爾根霉
灰色鏈霉菌 兩型孢毛霉
FBP活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),,6.22×103 L / mol /cm,;d:比色皿光徑,1cm,;V樣:加入樣本體積,,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,,1mL,;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,,g,。