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死活細胞測定及細胞活力測定實驗原理

時間:2017/3/7閱讀:3458
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(1)干細胞細胞膜通透性的差異:活細胞的細胞膜是一種選擇性膜,,對細胞起保護和屏障作用,,只允許物質(zhì)選擇性的通過;而細胞死亡之后,,細胞膜受損,通透性增加,。

(2)死活細胞在代謝上的差異:由于活細胞中新陳代謝的作用,,使細胞內(nèi)具有較強的還原能力,而死細胞或代謝緩慢的老細胞,,則因它們的無還原能力或還原能力極弱,。

常見的細胞染料有:中性紅(細胞器的專有染料)、臺盼藍,、甲基藍,、美藍、熒光素雙醋酸酯(FDA)等,。

① 中性紅染色:常用染料之一,,是細胞器的專有染料。利用干細胞膜的通透性差異,,用來染原生動物和顯示動植物組織中活細胞的內(nèi)含物等,。中性紅無毒,常做活體染色的染料,。

② 臺盼藍染色:當細胞損傷或死亡時,,臺盼藍可穿透變性的細胞膜,與解體的DNA 結合,,使其著色,。而活細胞能阻止染料進入細胞內(nèi)。故可以鑒別死細胞與活細胞,。嚴格來說,,臺盼藍染色檢測的是細胞膜的完整性,通常認為細胞膜喪失完整性,,即可認為細胞已經(jīng)死亡,。通過顯微鏡很容易就能識別出死亡的被臺盼藍染色的細胞,并可使用細胞計數(shù)器進行計數(shù),。

③ 美藍染色法:美藍是一種無毒性染料,,它的氧化型是藍色的,而還原型是無色的,,用它來對活細胞進行染色,,由于細胞中新陳代謝的作用,使細胞內(nèi)具有較強的還原能力,,能使美藍從藍色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型,,所以活細胞無色,而對于死細胞或代謝緩慢的老細胞,,則因它們無此還原能力或還原能力極弱,,而被美藍染成藍色或淡藍色。因此,,用美藍水浸片不僅可觀察酵母的形態(tài),,還可以區(qū)分死、活細胞.

干細胞甲基藍染色法:甲基藍染色與臺盼藍類似的染色機理,。

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