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死活細(xì)胞測定及細(xì)胞活力測定實(shí)驗(yàn)原理

時間:2017/3/7閱讀:3547
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(1)干細(xì)胞細(xì)胞膜通透性的差異:活細(xì)胞的細(xì)胞膜是一種選擇性膜,,對細(xì)胞起保護(hù)和屏障作用,只允許物質(zhì)選擇性的通過;而細(xì)胞死亡之后,,細(xì)胞膜受損,,通透性增加。

(2)死活細(xì)胞在代謝上的差異:由于活細(xì)胞中新陳代謝的作用,,使細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力,,而死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞,則因它們的無還原能力或還原能力極弱,。

常見的細(xì)胞染料有:中性紅(細(xì)胞器的專有染料),、臺盼藍(lán)、甲基藍(lán),、美藍(lán),、熒光素雙醋酸酯(FDA)等。

① 中性紅染色:常用染料之一,,是細(xì)胞器的專有染料,。利用干細(xì)胞膜的通透性差異,用來染原生動物和顯示動植物組織中活細(xì)胞的內(nèi)含物等,。中性紅無毒,,常做活體染色的染料。

② 臺盼藍(lán)染色:當(dāng)細(xì)胞損傷或死亡時,,臺盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜,,與解體的DNA 結(jié)合,使其著色,。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),。故可以鑒別死細(xì)胞與活細(xì)胞。嚴(yán)格來說,,臺盼藍(lán)染色檢測的是細(xì)胞膜的完整性,,通常認(rèn)為細(xì)胞膜喪失完整性,即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡。通過顯微鏡很容易就能識別出死亡的被臺盼藍(lán)染色的細(xì)胞,,并可使用細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù),。

③ 美藍(lán)染色法:美藍(lán)是一種無毒性染料,它的氧化型是藍(lán)色的,,而還原型是無色的,,用它來對活細(xì)胞進(jìn)行染色,由于細(xì)胞中新陳代謝的作用,,使細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力,,能使美藍(lán)從藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型,所以活細(xì)胞無色,,而對于死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞,,則因它們無此還原能力或還原能力極弱,而被美藍(lán)染成藍(lán)色或淡藍(lán)色,。因此,,用美藍(lán)水浸片不僅可觀察酵母的形態(tài),還可以區(qū)分死,、活細(xì)胞.

干細(xì)胞甲基藍(lán)染色法:甲基藍(lán)染色與臺盼藍(lán)類似的染色機(jī)理,。

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