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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>腫瘤細(xì)胞分離中需要注意的幾個問題
1.如果您要做腫瘤細(xì)胞培養(yǎng),,記住實(shí)驗(yàn)中所用的試劑(分離液,洗滌液等),、器械等都要是無菌消毒的,,并注意實(shí)驗(yàn)中的無菌操作。
2. 離心轉(zhuǎn)速單位及時(shí)間:目前國外的文獻(xiàn)報(bào)道基本上用g為單位,,注意g和轉(zhuǎn)速(rpm)的換算,。
3.離心溫度:有的要求室溫,有的要求4攝氏度,。實(shí)驗(yàn)的操作要求盡可能熟練,,連貫。
4.在用Ficoll分離單個核腫瘤細(xì)胞(PBMC)時(shí),,通常含有少量的紅細(xì)胞,,對于一般的實(shí)驗(yàn)影響不大,如果實(shí)驗(yàn)要求較高,,可采取裂解液(有的需要無菌),,并注意裂解時(shí)間控制,以免影響單個核細(xì)胞的活性,。
5. 在用Percoll配不連續(xù)梯度時(shí)(一般用高滲NaCl),,注意各成份體積的準(zhǔn)確性,,否則密度與預(yù)期的不一樣,,影響分離效果。
6.用全血離心效果比全血稀釋后再離心效果差,,稀釋一般等體積稀釋一倍,。
7.分離液與樣本的體積比:一般應(yīng)小于1:2(即一般為1體積分離液,2體積樣本,,不宜超過2體積,,小于2體積均可)
8.洗滌液的成分:不同文獻(xiàn)報(bào)道不一,有的使用PBS,,有的為Hank’s,,KRP等,,可自己選定。主要是離子濃度及成份的不同,,有的含有Mg2+,Ca2+,。
9.腫瘤細(xì)胞活性:0.2%臺盼藍(lán)染色3-5分鐘,鏡下觀察計(jì)數(shù)死亡細(xì)胞(藍(lán)染),。
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