轉(zhuǎn)化細(xì)胞通過高潮,、射線、微波以及器械進(jìn)行滅菌或除菌的方法均為物理滅菌方法,。

(1)紫外線消毒 用于消毒空氣,、操作臺面和一些不能用干熱、濕熱滅菌的培養(yǎng)器皿,，如塑料培養(yǎng)皿,、培養(yǎng)板等。這是常使用的消毒方法之一,。

(2)干熱滅菌 主要用于玻璃器皿的滅菌,。將用于細(xì)胞培養(yǎng)的器皿放人干燥箱內(nèi)，加熱至160℃,，保溫90-120 min,。用于RNA提取實(shí)驗(yàn)的用品則需180℃，保溫5-8 h。

(3)濕熱滅菌 此方法也稱為高壓蒸汽滅菌,，是zui有效的一種滅菌方法,。主要應(yīng)用范圍是布類、橡膠制品(如膠塞),、金屬器械,、玻璃器皿、某些塑料制品以及加熱后不發(fā)生沉淀的無機(jī)溶液(如Hanks液,、PBS,、20×SSC等)。手動高壓滅菌鍋操作如下：

①首先查看高壓鍋內(nèi)的水是否充足,，放人物品蓋好蓋,。

②加熱高壓鍋。將放氣閥打開,，放氣5—10 min,，以排除鍋內(nèi)的冷空氣。

③待鍋內(nèi)水沸騰后,，落下放氣閥繼續(xù)升溫升壓,，玻璃器皿等用15磅(121℃)30 min，膠塞,、塑料制品,、溶液等可用10磅(115 ℃)20 min。調(diào)節(jié)火力大小保持該壓力,。

④停止加熱,，待壓力自然下降至0再打開放氣閥排汽，開蓋,，取出高壓滅菌的物品烘干,。

電熱自動滅菌鍋使用說明(型號：SANYO Autoclave MLS-3020)：

①放氣筒加水至LOW水平線處，轉(zhuǎn)化細(xì)胞將與高壓鍋相連的導(dǎo)氣管插入放氣筒里,，然后將放氣筒歸于原位,。

②打開高壓鍋蓋，加入蒸餾水至高壓鍋底的水位線,，水位線位于V型凹槽的1/3-2/3處,。

③打開電源。

④設(shè)定高壓溫度及時間,，高壓鍋的溫度范圍為105-121℃,，高壓滅菌一般采用121℃20—30 min。

⑤把待高壓的物品置于高壓鍋內(nèi),，順時針方向?qū)xhaust鈕旋至close位置,。

⑥關(guān)閉高壓鍋蓋,，旋至顯示屏上左上角的紅亮點(diǎn)剛出現(xiàn)為止。

⑦按start鈕,，開始高壓,，在溫度達(dá)80℃時顯示器開始顯示溫度，當(dāng)溫度達(dá)到所需的設(shè)定溫度時,，在顯示屏的左下角有一長形的指示燈閃亮,，直到高壓時間結(jié)束后指示燈滅，此時蜂鳴器報(bào)警一聲,。當(dāng)壓力降至0 MPa時,，蜂鳴器再報(bào)警一聲。溫度降至80℃時,，蜂鳴器報(bào)警10次,。顯示屏溫度指示消失，此時才可打開鍋蓋,。

⑧關(guān)電源,，開高壓鍋蓋，取出已滅菌的物品,，烘干,。

(4)濾過除菌 用于培養(yǎng)用液和各種不能高壓滅菌的溶液的滅菌。采用金屬濾器和小型的塑料濾器,，配上可以更換的微孔濾膜,，極大地方便了操作。濾器型號按直徑大小劃分,。如過濾量大的培養(yǎng)用液常用較大型號的金屬濾器(直徑90 mm,、100 mm,、142 mm……等),，配以過濾泵使用。過濾量較小的液體常用注射器推動的塑料小濾器(直徑20 mm,、25 mm等),。濾膜孔徑有0.60 μm、0.45 μm,、0.35 μm,、0.22 μm、0.10μm等,，以0.22 μm除菌zui為保險,，但對于較粘稠難濾過的液體，仍需選用孔徑較大的濾膜,。

①在過濾器上裝上微孔濾膜,，孔徑為0.22μm,。

②轉(zhuǎn)化細(xì)胞用布包好，濕熱滅菌后使用,。