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無血清培養(yǎng)基(serum-free medium, SFM)系指不含任何血清成分的合成培養(yǎng)基,。近年來,,因為細胞治療(cell therapy)的快速發(fā)展與生物工業(yè)上的制備抗體,、病毒抗原或是重組蛋白表達時,,細胞培養(yǎng)基中的血清成分復(fù)雜,,可能會影響制程或是增加不穩(wěn)定的因素,,因此,無血清培養(yǎng)基成為其目標(biāo),,現(xiàn)今已有許多成熟的產(chǎn)品可供應(yīng)研究人員做選擇,。
顧名思義,無血清培養(yǎng)基(serum-free medium, SFM)系指不含任何血清成分的合成培養(yǎng)基,。近年來,,因為細胞治療(cell therapy)的快速發(fā)展與生物工業(yè)上的制備抗體、病毒抗原或是重組蛋白表達時,,細胞培養(yǎng)基中的血清成分復(fù)雜,,可能會影響制程或是增加不穩(wěn)定的因素,因此,,無血清培養(yǎng)基成為其目標(biāo),,現(xiàn)今已有許多成熟的產(chǎn)品可供應(yīng)研究人員做選擇。
血清培養(yǎng)基的缺點
血清是一種成分極為復(fù)雜的混合物,,為細胞培養(yǎng)增添了許多不可控制的變因,。含有血清的培養(yǎng)基缺點如下:
(1) 價格昂貴,血清的費用約占細胞培養(yǎng)費用的50-60%,。
(2) 血清可能會帶有污染源,,F(xiàn)BS最常見的即為支原體或黑膠蟲污染,。
(3) 血清中復(fù)雜的成分會使疫苗、細胞因子,、單克隆抗體等的分離或純化帶來很大的困擾,。
無血清培養(yǎng)基的優(yōu)點
避免血清批次間的差異,提高細胞培養(yǎng)的可重復(fù)性,。
避免血清自身的污染源污染,。
避免血清成分影響研究結(jié)果或是產(chǎn)品制程。
提高產(chǎn)品表達水平并易于純化,。
無血清培養(yǎng)基的基本配方
基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分,。 用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細胞在體外培養(yǎng)時,多數(shù)呈貼壁生長或兼性貼壁生長,;而當(dāng)其在無血清,、無蛋白培養(yǎng)基中生長時,由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白,、層粘連蛋白,、膠原、玻表粘連蛋白,,細胞往往以懸浮形式生長,。
添加組分
1. 促貼壁物質(zhì):許多細胞必須貼壁才能生長,這種情況下無血清培養(yǎng)基中一定要添加促貼壁和擴展因子,,一般為細胞外基質(zhì),,如纖連蛋白、層粘連蛋白等,。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子,,對許多細胞的繁殖和分化,起著重要作用,。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化,,這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞,、粒細胞,、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞,、CHO細胞,、成肌細胞等。
2. 促生長因子及激素:針對不同細胞添加不同的生長因子,。激素也是刺激細胞生長,、維持細胞功能的重要物質(zhì),有些激素是許多細胞必須的,,如胰島素,。
3. 酶抑制劑:培養(yǎng)貼壁生長的細胞,,需要用胰酶消化傳代,在無血清培養(yǎng)基中須含酶抑制劑,,以終止酶的消化作用,,達到保護細胞的目的。常用的是大豆胰酶,;抑制劑,。
4. 結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運蛋白:常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比較大,,可增加培養(yǎng)基的粘度,,保護細胞免受機械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白,。
5. 微量元素:硒是最常見的,。
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