環(huán)境因素
1．無菌環(huán)境
無毒和無菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件,。細(xì)胞在活體內(nèi)，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵,，但細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過程中,，缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)的保護(hù)而喪失對(duì)微生物的防御能力和對(duì)有害物質(zhì)的解毒能力。為保證細(xì)胞能在體外環(huán)境中生長繁殖,，必須要確保無菌工作區(qū)域,、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作,。
常見的微生物污染有支原體,、細(xì)菌、真菌,。支原體無致死毒性,，可與細(xì)胞長期共存，對(duì)細(xì)胞有潛在影響,，但體積小,，不易鑒別，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來進(jìn)行檢測,。細(xì)菌增殖快,，在短時(shí)間內(nèi)即可大量擴(kuò)增，并產(chǎn)生毒素殺死細(xì)胞,。真菌的種類繁多,，肉眼可見，漂浮于培養(yǎng)液面上,，可呈絲狀,、管狀或樹枝狀等。

2.合適的溫度
一般哺乳類與禽類細(xì)胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃,，不適宜的環(huán)境溫度會(huì)影響細(xì)胞的生長。細(xì)胞對(duì)低溫的耐受能力要強(qiáng)于對(duì)高溫的耐受能力，在低溫下,，細(xì)胞的代謝活力及核分裂能力降低,。若溫度不低于0℃，雖然細(xì)胞代謝受到影響,，但無損傷作用,；25～35℃時(shí)，細(xì)胞以緩慢的速度生長,；但若被置于40℃數(shù)小時(shí),，則不僅不利于細(xì)胞生存、生長,，甚至可導(dǎo)致其死亡,。

3.適宜的滲透壓
高滲溶液或低滲溶液會(huì)引起細(xì)胞發(fā)生褶皺、腫脹,、破裂,。因此，滲透壓是體外培養(yǎng)細(xì)胞的重要條件之一,。多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)滲透壓都有一定的耐受能力,，實(shí)際應(yīng)用中，260～320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細(xì)胞,。

4．氣體環(huán)境與pH
細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境,，氧氣、二氧化碳是細(xì)胞生存的必要條件,。氧氣參與細(xì)胞的三羧酸循環(huán),，為細(xì)胞生存、代謝與合成提供能量,；二氧化碳既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,，是細(xì)胞生長的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān),。大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4,。在開放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳?xì)怏w比例為宜,。

營養(yǎng)條件
1．培養(yǎng)基
細(xì)胞培養(yǎng)基包含細(xì)胞生長所需的各種營養(yǎng)物質(zhì),，包括碳水化合物、氨基酸,、無機(jī)鹽,、維生素等。針對(duì)不同細(xì)胞的營養(yǎng)需求,，有多種合成培養(yǎng)基可供選擇,，如EBSS,、Eagle、MEM,、RPMll640,、DMEM等

2．其他添加成分
在各種合成培養(yǎng)基提供基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)之外，還需根據(jù)不同細(xì)胞和不同的培養(yǎng)目的添加其他成分,，如血清,、因子等。
血清提供的是細(xì)胞外基質(zhì),、生長因子和轉(zhuǎn)鐵蛋白等重要物質(zhì),，常用的是胎牛血清。要根據(jù)不同的細(xì)胞和不同的研究目的決定添加血清的比例,。10%～20%的血清能維持細(xì)胞較快的生長增殖速度,，稱為生長培養(yǎng)液；為維持細(xì)胞緩慢生長或不死,，添加2%～5%的血清即可,，稱為維持培養(yǎng)液。但血清中也存在有害于細(xì)胞生長和繁殖的物質(zhì),，如補(bǔ)體,、免疫球蛋白和一些生長抑制因子；成分不明確,，影響對(duì)結(jié)果的分析,；不同動(dòng)物、不同批次的血清活性差別較大,，影響培養(yǎng)效果的穩(wěn)定性,。
谷氨酰胺是細(xì)胞生長重要的氮源，在細(xì)胞生長代謝過程中起重要作用,，但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定容易降解,，4℃下放置7天即可分解約50%，故谷氨酰胺需在使用前添加,。