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胰酶配置方法:
1,、培養(yǎng)液配制,,方便好用,對細胞影響小,,并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解
2,、生理鹽水配制,要先調(diào)ph值7.2到7.4(①胰酶(1:250) 2.5 克②EDTA-Na 0.3克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.005克⑦Water 1000 mL磁力攪拌2-3小時,,調(diào)pH 7.8-8.0,,過濾除菌。)
3,、pbs(0.1%胰酶溶液的配制:稱取胰酶粉末0.1g,,先用少許滅菌過的PBS調(diào)成糊狀,然后補足到100ml,。置室溫攪拌4小時或冰箱內(nèi)過夜,,過濾滅菌,分裝,,4℃保存?zhèn)溆?。? 或是hanks或是D-hanks液配制(1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,先用少許D-Hanks 平衡鹽溶液(pH7.2 左右)調(diào)成糊狀,,然后再補足D-Hanks 平衡鹽溶液,,攪拌混勻,置室溫4 小時或冰箱過夜,,并不斷攪拌振蕩,;2.次日,先用濾紙粗濾,再進行過濾除菌,,分裝入瓶中,,低溫冰箱保存?zhèn)溆茫S脻舛葹?.25% 或0.125%,。胰蛋白酶溶液偏酸,,使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH 至7.2 左右。)
一般0.45微米的一次性濾器過濾除菌,,至于作用效果,,需要消化一次細胞感覺一下,因為不同廠家的酶不一樣,,有的作用溫和,,有的作用劇烈。
4,、是否需要四度放置過夜,,取決于你的胰酶的純度。過去的胰酶純度不高,,所以難以溶解,,需要四度過夜. 而現(xiàn)在的胰酶純度都很高,就沒有必要四度過夜,。從理論上來說,,四度放置過夜,給細菌生長的機會,,盡管過濾可以出去細菌,可是出不掉其代謝產(chǎn)物,。
胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因,,考慮有:
1、過期或是酶已經(jīng)部分變性
2,、溶液ph值不對
3,、在沒過濾之前的絮狀沉淀是正常現(xiàn)象,,因胰酶多取自動物胰腺,,沉淀為組織塊,過濾后即可
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