胰酶使用注意：

1,、在使用胰酶細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染,。

2,、胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差,。

貼壁細(xì)胞的消化：

1,、吸去培養(yǎng)液，用無(wú)菌的PBS,、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,，以去除殘余的血清

2、加入少量胰酶細(xì)胞消化液,，略蓋過(guò)細(xì)胞即可,，根據(jù)胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘（不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同）

3,、顯微鏡下觀察,，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀,；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),。

4、此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液,。加入含血清的*細(xì)胞培養(yǎng)液,，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)如果發(fā)現(xiàn)消化不足,，則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化,。

如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞,，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,，直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000-2000g離心1分鐘,，沉淀細(xì)胞,，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。

常用的細(xì)胞消化液為胰蛋白酶（Trypsin）,，EDTA等，其功能主要是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞外基質(zhì)）水解,，改變細(xì)胞間的連接，使組織或細(xì)胞片分散成單個(gè)細(xì)胞,，制成細(xì)胞懸液用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn),。

影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配制條件,、凍存或4℃保存時(shí)間長(zhǎng)短,、是否反復(fù)凍融、化凍后存放時(shí)間及溫度等）,、消化時(shí)的溫度（氣溫,、細(xì)胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等 。

加入胰蛋白酶-EDTA溶液,，視細(xì)胞瓶的大小加入體積為2ml或更多（依培養(yǎng)器皿的大小而定）,，以使充分浸潤(rùn)；

一般消化時(shí)間約為1至3分鐘,，肉眼觀察瓶底由半透明（細(xì)胞單層連接成片）轉(zhuǎn)為透明,、點(diǎn)狀（出現(xiàn)細(xì)小空隙）時(shí)，棄去細(xì)胞消化液,，或看見(jiàn)培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可,。并加入適量的*培養(yǎng)液終止消化，吹打分散,；如見(jiàn)大量細(xì)胞片狀脫落,，已消化過(guò)頭，則不能頃倒消化液而直接進(jìn)行下一步操作,。（消化過(guò)頭,，可造成大量細(xì)胞從瓶壁上脫下，甚至造成細(xì)胞破碎,。由于血清含有非特異性胰蛋白酶抑制劑,，所以加入*培養(yǎng)基可以終止反應(yīng)。