胰酶使用注意：

1,、在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染,。

2,、胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長,，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差,。

胰酶配制方法：

1、培養(yǎng)液配制,，方便好用,，對細(xì)胞影響小，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解

2,、生理鹽水配制,，要先調(diào)ph值7.2到7.4（①胰酶（1：250） 2.5 克②EDTA-Na 0.3克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.005克⑦Water 1000 mL磁力攪拌2-3小時(shí)，調(diào)pH 7.8-8.0,，過濾除菌,。）

3、pbs（0.1%胰酶溶液的配制：稱取胰酶粉末0.1g,，先用少許滅菌過的PBS調(diào)成糊狀,，然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過夜,，過濾滅菌,，分裝,，4℃保存?zhèn)溆谩＃? 或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,，先用少許D-Hanks 平衡鹽溶液（pH7.2 左右）調(diào)成糊狀,，然后再補(bǔ)足D-Hanks 平衡鹽溶液，攪拌混勻,，置室溫4 小時(shí)或冰箱過夜,，并不斷攪拌振蕩；2.次日,，先用濾紙粗濾,，再進(jìn)行過濾除菌，分裝入瓶中,，低溫冰箱保存?zhèn)溆?，常用濃度?.25% 或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸,，使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH 至7.2 左右,。）

一般0.45微米的一次性濾器過濾除菌，至于作用效果,，需要消化一次細(xì)胞感覺一下，因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣,，有的作用溫和,，有的作用劇烈。

4,、是否需要四度放置過夜,，取決于你的胰酶的純度。過去的胰酶純度不高,，所以難以溶解,，需要四度過夜. 而現(xiàn)在的胰酶純度都很高，就沒有必要四度過夜,。從理論上來說,，四度放置過夜，給細(xì)菌生長的機(jī)會,，盡管過濾可以出去細(xì)菌,，可是出不掉其代謝產(chǎn)物。

胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因,，考慮有：

1,、過期或是酶已經(jīng)部分變性

2、溶液ph值不對

3,、在沒過濾之前的絮狀沉淀是正?，F(xiàn)象,，因胰酶多取自動物胰腺，沉淀為組織塊,，過濾后即可,。