細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以zui大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷,。

細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng),、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段,。在細(xì)胞建株和建系中，及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的,。在雜交瘤單克隆抗體的制備過(guò)程中,，雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是的實(shí)驗(yàn)操作,。因?yàn)樵跊](méi)有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候,，細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染,、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，如果沒(méi)有原始細(xì)胞的凍存,，則因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄,。

1、常用凍存液組成成分
20％血清（FBS）,、10％DMSO,、70％1640培養(yǎng)液；或90％血清（FBS）,、10％DMSO,，更可防止細(xì)胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中,，各自含量占總體積的10%，然后濾膜過(guò)濾后分裝保存?zhèn)溆谩?/span>

2,、DMSO在凍存液中的作用
DMSO在4℃時(shí)對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性,，分子量小、溶解度大,、易透過(guò)細(xì)胞膜,，降低細(xì)胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度,，使細(xì)胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過(guò)分外滲，避免了細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮,；DMSO與水分子結(jié)合,，可使冰點(diǎn)下降,，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少冰晶損傷。

3,、注意事項(xiàng)
1.DMSO 不用高壓滅菌；DMEM不能高溫高壓滅菌,，可以過(guò)濾除菌,。
2.DMSO要用新的，而且要避光保存,。
3.DMSO：含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。