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細胞培養(yǎng)基的種類與基本成分

時間:2022-3-7閱讀:1502

細胞培養(yǎng)基是人工模擬細胞在體內生長的營養(yǎng)環(huán)境,是提供細胞營養(yǎng)和促進細胞生長增殖的物質基礎,。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同,,英文都是medium,。當它是粉劑時,,傾向性地稱為培養(yǎng)基,而將粉劑配成液體后,,多稱為培養(yǎng)液,。培養(yǎng)液中常常補加血清、抗生素等成分,。由于各類微生物對營養(yǎng)的要求不同,,培養(yǎng)目的和檢測需要不同,因而培養(yǎng)基的種類很多,。我們可根據(jù)某種標準,,將種類繁多的培養(yǎng)基劃分為若干類型。

一,、根據(jù)對培養(yǎng)基組成物質的化學成分是否*了解來區(qū)分,,可以將培養(yǎng)基分為:天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基,。
1,、天然培養(yǎng)基
天然培養(yǎng)基是指利用各種動、植物或微生物的原料,,其成分難以確切知道,。用作這種培養(yǎng)基的主要原料有:牛肉膏、麥芽汁,、蛋白胨,、酵母膏、玉米粉,、麩皮,、各種餅粉、馬鈴薯,、牛奶,、血清等,。用這些物質配成的培養(yǎng)基雖然不能確切知道它的化學成分,,但一般來講,營養(yǎng)是比較豐富的,,微生物生長旺盛,,而且來源廣泛,配制方便,,所以較為常用,,尤其適合于配制實驗室常用的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基的穩(wěn)定性常受生產廠或批號等因素的影響。
2,、合成培養(yǎng)基
合成培養(yǎng)基是一類化學成分和數(shù)量*知道的培養(yǎng)基,,它是用已知化學成分的化學藥品配制而成。這類培養(yǎng)基化學成分精確,、重復性強,,但價格昂貴,而微生物又生長緩慢,,所以它只適用于做一些科學研究,,例如營養(yǎng)、代謝的研究,。
3,、半合成培養(yǎng)基
在合成培養(yǎng)基中,加入某種或幾種天然成分,;或者在天然培養(yǎng)基中,,加入一種或幾種已知成分的化學藥品即成半合成培養(yǎng)基。例如馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基等,。這種培養(yǎng)基在生產實踐和實驗室中使用最多,。

二、根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)來區(qū)分,,可以分為:固體培養(yǎng)基,、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。
1,、固體培養(yǎng)基
在液體培養(yǎng)基中加入適量的凝固劑即成固體培養(yǎng)基,。常用作凝固劑的物質有瓊脂、明膠,、硅膠等,,其中以瓊脂最為常用。固體培養(yǎng)基在實際中用得十分廣泛,。在實驗室中,,它被用作微生物的分離、鑒定,、檢驗雜菌,、計數(shù)、保藏,、生物測定等,。
2、液體培養(yǎng)基
所配制的培養(yǎng)基是液態(tài)的,,其中的成分基本上溶于水,,沒有明顯的固形物,,液體培養(yǎng)基營養(yǎng)成分分布均勻,易于控制微生物的生長代謝狀態(tài),。
3,、半固體培養(yǎng)基
如果把少量的凝固劑加入到液體培養(yǎng)基中,就制成了半固體培養(yǎng)基,。以瓊脂為例,,它的用量在0.2~1%之間。這種培養(yǎng)基有時可用來觀察微生物的動力,,有時用來保藏菌種,。

三、根據(jù)培養(yǎng)基的用途來區(qū)分,,可以分為:選擇培養(yǎng)基,、增殖培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基等。
1,、選擇培養(yǎng)基
選擇培養(yǎng)基利用微生物對某種或某些化學物質的敏感性不同,,在培養(yǎng)基中加入這類物質,抑制不需要的微生物生長,,而利用所需分離的微生物生長,,從而達到分離或鑒別某種微生物的目的,如分離真菌的馬丁氏培養(yǎng)基,。既有選擇作用又有鑒別作用的培養(yǎng)基,,如鑒別腸道桿菌的遠藤氏培養(yǎng)基。
2,、增殖培養(yǎng)基
在自然界中,,不同種的微生物常生活在一起,為了分離我們所需要的微生物,,在普通培養(yǎng)基中加入一些某種微生物特別喜歡的營養(yǎng)物質,,以增加這種微生物的繁殖速度,逐漸淘汰其它微生物,,這種培養(yǎng)基稱為增殖培養(yǎng)基,,這種培養(yǎng)基常用于菌種篩選和選擇增菌中。在某種程度上講,,增殖培養(yǎng)基也是一種選擇培養(yǎng)基,。
3、鑒別培養(yǎng)基
鑒別培養(yǎng)基是一類含有某種特定化合物或試劑的培養(yǎng)基,。某種微生物在這種培養(yǎng)基上培養(yǎng)后,,它所產生的某種代謝產物與這種特定的化合物或試劑能發(fā)生某種明顯的特征性反應,根據(jù)這一特征性反應可以將某種微生物與其他中微生物區(qū)別開來,。主要用于不同類型微生物的快速鑒定,,如用來檢查細菌能否產生硫化氫的醋酸鉛培養(yǎng)基。

天然培養(yǎng)基
天然培養(yǎng)基是指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基,,如血漿,、血清、淋巴液,、雞胚浸出液等,。組織培養(yǎng)技術建立早期,體外培養(yǎng)細胞都是利用天然培養(yǎng)基,。但是由于天然培養(yǎng)基制作過程復雜,、批間差異大,因此逐漸被合成培養(yǎng)基所替代,。

小牛血清
用于細胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清,,培養(yǎng)某些特殊細胞也用人血清、馬血清等,。選擇用牛血清培養(yǎng)細胞的原因主要是來源充足,、制備技術成熟、經過長時間的應用考驗人們對其有比較深入的理解,。牛血清分為小牛血清,、新牛血清、胎牛血清,。小牛血清取自出生10~30 天的小牛,;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;胎牛血清應取自剖腹產的胎牛,。顯然,,胎牛血清是品質zui高的,因為胎牛還未接觸外界,,血清中所含的抗體,、補體等對細胞有害的成分最少。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的,,但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物血清更合適,。牛血清中含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,具有極為重要的功能,。

血清主要作用
(1) 提供基本營養(yǎng)物質:氨基酸,、維生素、無機物,、脂類物質,、核酸衍生物等,是細胞生長必須的物質,。
(2) 提供激素和各種生長因子:胰島素,、腎上腺皮質激素(氫化可di松,、地塞米松)、類固醇激素(雌二醇,、睪酮,、孕酮)等。生長因子如成纖維細胞生長因子,、表皮生長因子,、血小板生長因子等。
(3) 提供結合蛋白:結合蛋白作用是攜帶重要的低分子量物質,,如白蛋白攜帶維生素,、脂肪、以及激素等,,轉鐵蛋白攜帶鐵,。結合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用
(4) 提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷,對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用,。

組成及作用
氨基酸
組成蛋白質的基本單位,。不同種類的細胞對氨基酸的要求各異,但有幾種氨基酸細胞自身不能合成,,必須依靠培養(yǎng)液提供,,這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氨酰胺是細胞合成核酸和蛋白質必需的氨基酸,,在缺少谷氨酰胺時,,細胞生長不良而死亡[1] 。
必需氨基酸包括L-谷氨酰胺,、L-組氨酸,、L-異亮氨酸、L-亮氨酸,、L-賴氨酸,、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸,、L-蘇氨酸,、L-色氨酸、L-纈氨酸等,。

維生素
維持細胞生長的生物活性物質,,在細胞代謝中起調節(jié)及控制作用。在細胞培養(yǎng)中,,盡管血清是維生素重要來源,,但是許多培養(yǎng)基中添加了各種維生素以適合更多的細胞系生長。
脂溶性維生素如:A、D,、E,、K。
水溶性維生素如:B1,、B2,、B6,、B12,、泛酸、葉酸,、生物素,、C、煙酰胺等,。
許多維生素參與構成各種酶的活性基團的成分,,沒有它們,酶便沒有活性,,代謝活動將無法進行,。
VA是細胞合成糖蛋白時寡糖基的載體,對上皮細胞有重要的維護作用,。VD參與調節(jié)鈣的吸收,。VE是抗氧劑,可防止組成生物膜的磷脂中不飽和脂肪酸被氧化,。VK缺乏會引起低凝血酶原及凝血時間延長,。
葉酸是合成四氫葉酸的重要原料,四氫葉酸在核酸的生物合成和蛋白質的生物合成過程中起重要作用,。
生物素是一些特異羧化酶的組成部分,,參與糖代謝和脂肪酸的合成過程。

碳水化合物
碳水化合物是細胞生長主要能量來源,,其中有的是合成蛋白質和核酸的成分,。主要有葡萄糖、核糖,、脫氧核糖,、丙酮酸鈉和醋酸等。

無機離子
鈉,、鉀,、鎂、鈣,、磷等基本的無機離子,,這些都是細胞組成所必須并參與細胞的代謝。
培養(yǎng)液中無機鹽的主要功能是幫助細胞維持滲透壓平衡,。此外,,通過提供鈉,,鉀和鈣離子,幫助細胞調節(jié)細胞膜功能,。培養(yǎng)液的滲透壓是一個非常重要的因素, 細胞通??赡褪?60mOsm/kg ?320 mOsm/kg。標準培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內波動,。特別注意:向培養(yǎng)液中加入其它物質有可能會明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓,,特別是溶于強酸或強堿中的物質。

Na+是細胞外液中最主要的陽離子,,對維持滲透壓的恒定有決定性的作用,。K+主要分布在細胞內液,細胞內K +的對于激活某些酶是必需的,,它在調節(jié)細胞內環(huán)境的酸堿平衡也有極重要意義,。Ca2+ 在細胞外液中的作用是將組織內部細胞之間相互粘著,在細胞內參與許多重要的細胞生理活動,,如傳導,、參與肌肉細胞收縮等。Mg2+ 是構成細胞間質的重要成分,,對于細胞間相互穩(wěn)定結合有很重要的意義,。磷的化合物對細胞物質代謝和生理功能調控的功用是十分廣泛而*。

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