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當(dāng)前位置:蒂科(上海)生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>血清 你不能不知道的一些事情,!
要做細(xì)胞培養(yǎng),,首先要了解的是,,要用什么樣的血清。
普通的細(xì)胞培養(yǎng),,血清是*的,,當(dāng)然啦,也有一些需要無(wú)血清培養(yǎng),。比如一些CIK細(xì)胞,,不能用動(dòng)物源性的血清進(jìn)行培養(yǎng),以免會(huì)輸?shù)饺梭w之后,,導(dǎo)致產(chǎn)生異體免疫反應(yīng),。胎牛血清(FBS)是zui常用,也是的細(xì)胞生長(zhǎng)的補(bǔ)充試劑,,通常優(yōu)于其他類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)血清。
主要是由于血清中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)以及細(xì)胞生長(zhǎng)因子,,這些都是細(xì)胞生長(zhǎng)*的,。那為啥不用成年牛的血清,或者新生牛的血清呢,?很簡(jiǎn)單因?yàn)樘ヅsw內(nèi)抗體含量低,,不會(huì)造成與細(xì)胞的抗體的交叉反應(yīng)。一般胎牛都是取自奶牛場(chǎng)的小公牛,,因?yàn)樗鼈儾粫?huì)產(chǎn)奶,,好吧……
那問(wèn)題又來(lái)了,有時(shí)候會(huì)人的細(xì)胞養(yǎng)出一堆黑乎乎的顆粒,,很多人管這個(gè)叫黑膠蟲(chóng),。但其實(shí)并沒(méi)有確定一定有黑膠蟲(chóng)這種生物,而且這玩意是呈布朗運(yùn)動(dòng)的,,就是隨機(jī)的無(wú)規(guī)則運(yùn)動(dòng),。有很多人認(rèn)為可能這玩意是一種蛋白結(jié)晶,有的認(rèn)為這是一種原蟲(chóng),,但Google上是搜不到黑膠蟲(chóng)的,。瓦特唉ver,,這玩意兒會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)。
對(duì)于這個(gè),,有很多人認(rèn)為這個(gè)跟血清的產(chǎn)地有關(guān)系,。為啥米國(guó)人要把血清分級(jí)啊,肯定是低級(jí)的引起了黑膠蟲(chóng)污染,,也挺難說(shuō)到底是不是這樣的,。嘛,那米國(guó)人為啥要給血清分級(jí)呢,?因?yàn)槊讎?guó)農(nóng)業(yè)部(USDA)認(rèn)為,,有個(gè)別國(guó)家沒(méi)有牛海綿狀腦病(BSE,,就是瘋牛病啦)和口蹄疫(FMD),,這些國(guó)家的FBS肯定要一些。這些沒(méi)有疫情的國(guó)家包括澳洲,、北美洲和中美洲,,但米國(guó)農(nóng)業(yè)部只允許新西蘭和加拿大的牛血清,在不進(jìn)行測(cè)試的情況下進(jìn)口到美國(guó),。其他國(guó)家,,比如澳大利亞,墨西哥之類(lèi)的中美洲國(guó)家啥的,,都需要檢測(cè)使命藍(lán)舌病毒,、赤坂病毒等等。而南美洲被認(rèn)為是疫情嚴(yán)重地區(qū),,是堅(jiān)決不允許進(jìn)入米國(guó)市場(chǎng)的,。
從世界動(dòng)物衛(wèi)生組織是政府間動(dòng)物衛(wèi)生技術(shù)組織OIE(http://www.oie.int/animal-health-in-the-world/official-disease-status/bse/list-of-bse-risk-status/)公布的數(shù)據(jù)來(lái)看,其實(shí)美國(guó)和加拿大本身都有BSE疫情,,這也真的是蠻奇怪的,,沒(méi)有BSE疫情的反而是一些南美國(guó)家包括:烏拉圭、哥倫比亞,、巴拉圭,、秘魯、巴西,、阿根廷這些反而是沒(méi)有BSE疫情的地方,,但米國(guó)就是這樣任性,說(shuō)什么也不進(jìn)口南美的,。
但口蹄疫的疫情,,南美更嚴(yán)重些。
澳洲的血清就更貴一些,為啥呢,?因?yàn)榇蠹艺J(rèn)為澳洲的血清都是被隔離在大島上生產(chǎn)出來(lái)的,,天然,純凈(沒(méi)有進(jìn)口牛),,無(wú)污染,。和奶粉一個(gè)道理……這樣的話,南美的血清就便宜到爆了,。所以會(huì)有大批的商人,,用南美血清,冒充澳洲血清,。
那問(wèn)題來(lái)了,,這樣的話會(huì)有什么樣的危害呢?
說(shuō)到危害,,我們又要講一個(gè)概念,,就是血清收集的方法以及血清制品的處理,zui關(guān)鍵的血清處理就在于過(guò)濾,、去除內(nèi)毒素和血紅蛋白,。血紅蛋白會(huì)對(duì)細(xì)胞有很大的影響,特別是培養(yǎng)干細(xì)胞,,使用的血清的血紅蛋白含量必須≤10mg/dl,,內(nèi)毒素含量也需要≤10EU/ml。過(guò)濾也需要使用從0.04μm至0.45μm范圍的濾器,,一般來(lái)說(shuō),,0.04μm的濾器可以過(guò)濾掉基本所有的支原體和真菌細(xì)菌,但劣質(zhì)點(diǎn)的血清不會(huì)用這樣的濾器,。這個(gè)的行業(yè)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)是用三個(gè)0.1μm的濾器來(lái)過(guò)濾,。
的胎牛血清的指標(biāo)大概是這樣的:
1)血紅蛋白≤10mg/dl(≤20mg/dl的話也說(shuō)得過(guò)去的,記住FBS越紅越嗦,,就是越紅越爛;顏色越淺,,等級(jí)就越高)
2)內(nèi)毒素≤10EU/ml
3)總蛋白含量:30-40mg/ml(多了就不是胎牛了,,可能是新生牛血清或者成年牛血清冒充的)
4)產(chǎn)地:澳洲>北美>中美>…>南美>國(guó)產(chǎn)(因?yàn)楹枚鄧?guó)產(chǎn)都是一字記之曰“亂來(lái)”)
質(zhì)量差的血清越容易出問(wèn)題。
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