動物血清的常見問題及處理方法
?1. 血清保存: 建議血清應保存在-5℃至-2O℃,。然而,,若存放于4℃時,,請勿超過一個月,。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?,再放回冷凍?/span>
動物血清的常見問題及處理方法
?2. 解凍血清的方法: 建議您將血清從冷凍箱取出后,,先置于2~8℃冰箱使之融解,,然后在室溫下使之全融,。但必須注意的是,,融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
動物血清的常見問題及處理方法
?3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),,該如何處理?
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,,并不影響血清本身的質量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,,可以將血清分裝至無菌離心管內,,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜,。
動物血清的常見問題及處理方法
?4. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng),。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,,細胞和血小板釋放組胺,,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,,培養(yǎng)ES細胞,,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清,。
動物血清的常見問題及處理方法
?5. 有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的,。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,,而造成細胞生長速率的降低,。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,,而把血清放在37℃環(huán)境中,,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增,。
因此我們建議您,,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步,。如此一來,,不但節(jié)省您寶貴的時間,更確保血清的質量!
動物血清的常見問題及處理方法
?6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀?
胎牛血清沒有預老化,,儲存在2-8℃時,,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,,避免反復凍融,。
動物血清的常見問題及處理方法
?7. 如何避免沉淀物的產生?
解凍血清時,,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),,實驗顯示非常容易產生沉淀物,。
解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,,使溫度及成分均一,,減少沉淀的發(fā)生。
請勿將血清置于37℃太久,。若在37℃放置太久,,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,,而影響血清的質量,。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,,可以無須做此步驟,。
若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,,30分鐘的原則,,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,,時間過久或搖晃不均勻,,都會造成沉淀物的增多
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