ELISA實(shí)驗(yàn)技巧：ELISA（雙抗體夾心法）檢測(cè)HBsAg

以已知抗體(抗HBs)包被載體，然后將含有抗原的待檢標(biāo)本加入，共同孵育后，抗原結(jié)合于包被抗體上，再加入酶標(biāo)記特異抗體(酶標(biāo)抗HBs)，酶標(biāo)抗體連接到抗原上，zui后加入底物溶液,，根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量。

【材料】HBsAg試劑盒，本試劑盒含：
1,、包被抗-HBs反應(yīng)條
1瓶
2,、酶結(jié)合物
1瓶
3、HBSAg陽(yáng)性對(duì)照
1瓶
4,、HBsAg陰性對(duì)照
1瓶
5,、洗滌液:用前每瓶作1：20稀釋
1瓶
6、顯色劑(TMB)A
1瓶
7,、顯色劑(TMB)B
1瓶
8,、終止液
1瓶

【方法】

1、加入待測(cè)標(biāo)本每孔0.05ml,，并設(shè)HBsAg陽(yáng)性對(duì)照2孔,，HBsAg陰性對(duì)照2孔，空白對(duì)照1孔,，然后加入酶結(jié)合物每孔1滴(0.05ml,、空白對(duì)照孔不加)，充分混勻后置37℃孵育30分鐘,。
2,、洗板:棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體、拍干,、用洗滌液注滿每孔,，棄去拍干，反復(fù)五次后拍干,。
3,、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml)，然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml),，混勻,，37℃孵育10分鐘。
4,、每孔加終止液1滴(0.05ml),，混勻。

【結(jié)果】

比色法:波長(zhǎng)450nm,，先用空白孔校零點(diǎn),，然后讀取各孔光密度值,。
樣品OD值/陰性對(duì)照平均OD值≥ 2.1判斷為陽(yáng)性,，否則為陰性。
備注：陰性對(duì)照平均OD值低于0.05作0.05計(jì)算,，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算,。陽(yáng)性對(duì)照OD值≥0.8，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效,。

【注意事項(xiàng)】
1,、試劑盒置2℃～8℃保存,。
2、使用前試劑應(yīng)搖勻,，并棄去1～2滴后垂直滴加,。
3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測(cè)標(biāo)本所需微孔條,，置室溫平衡30分鐘后再行測(cè)試,，余者應(yīng)及時(shí)封存于冰箱中以備后用。
4,、待測(cè)標(biāo)本不可用NaN3防腐,。
5、不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用,。
6,、結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。
7,、若濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶時(shí),，請(qǐng)置37℃至溶解。