ELISA實驗技巧：ELISA（雙抗體夾心法）檢測HBsAg

以已知抗體(抗HBs)包被載體，然后將含有抗原的待檢標本加入,，共同孵育后,，抗原結(jié)合于包被抗體上,，再加入酶標記特異抗體(酶標抗HBs)，酶標抗體連接到抗原上,，zui后加入底物溶液,，根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量。

【材料】HBsAg試劑盒,，本試劑盒含：
1,、包被抗-HBs反應(yīng)條
1瓶
2、酶結(jié)合物
1瓶
3,、HBSAg陽性對照
1瓶
4,、HBsAg陰性對照
1瓶
5、洗滌液:用前每瓶作1：20稀釋
1瓶
6,、顯色劑(TMB)A
1瓶
7,、顯色劑(TMB)B
1瓶
8、終止液
1瓶

【方法】

1,、加入待測標本每孔0.05ml,，并設(shè)HBsAg陽性對照2孔,，HBsAg陰性對照2孔,，空白對照1孔，然后加入酶結(jié)合物每孔1滴(0.05ml,、空白對照孔不加),，充分混勻后置37℃孵育30分鐘。
2,、洗板:棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體,、拍干、用洗滌液注滿每孔,，棄去拍干,，反復(fù)五次后拍干。
3,、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml),，然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml),，混勻，37℃孵育10分鐘,。
4,、每孔加終止液1滴(0.05ml)，混勻,。

【結(jié)果】

比色法:波長450nm,，先用空白孔校零點，然后讀取各孔光密度值,。
樣品OD值/陰性對照平均OD值≥ 2.1判斷為陽性,，否則為陰性。
備注：陰性對照平均OD值低于0.05作0.05計算,，高于0.05按實際OD值計算,。陽性對照OD值≥0.8，實驗結(jié)果有效,。

【注意事項】
1,、試劑盒置2℃～8℃保存。
2,、使用前試劑應(yīng)搖勻,，并棄去1～2滴后垂直滴加。
3,、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔條,，置室溫平衡30分鐘后再行測試，余者應(yīng)及時封存于冰箱中以備后用,。
4,、待測標本不可用NaN3防腐。
5,、不同批號試劑請勿通用,。
6、結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成,。
7,、若濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶時，請置37℃至溶解,。