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當(dāng)前位置:上海仁捷生物科技有限公司>>公司動態(tài)>>上海仁捷生物ELISA試劑盒樣本的大致處理方法
一,、液體樣本
液體樣本處理原則:所有的液體樣本,,用無菌管收集,,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),,如果以后碰到其他的液體樣本,,也按這個(gè)方法,,納入?yún)R總表。
1,、血清:用無菌管收集,,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),,仔細(xì)收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心,。
2,、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再次離心。
3,、尿液:用無菌管收集,,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
4、胸腹水:用無菌管收集,,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),,仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
5、腦脊液:用無菌管收集,,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),,仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
6、唾液:用無菌管收集,,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),,仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
7、細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),,用無菌管收集,。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
8,、牛奶:用無菌管收集,,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
9,、蜂蜜:用無菌管收集,,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
10,、全血:用含有抗凝劑的無菌管收集,,立即輕輕搖動,,來回輕輕顛倒數(shù)次,使血液和抗凝劑混勻,,以防血液凝固,。
二、固體樣本
固體樣本處理原則:稱取1g的固體樣本,,用9g的合適緩沖液溶解,,分泌蛋白可以直接離心取上清檢測,細(xì)胞內(nèi)的蛋白,,要先收集細(xì)胞,,再用合適方法破碎,離心取上清測試,。
1,、組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取1g組織,,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),,仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測,,其余冷凍備用,,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。對于植物組織,,不好勻漿的話,就在液氮中充分研磨,;
2,、細(xì)胞內(nèi)蛋白樣本
許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白,,這個(gè)時(shí)候,,要先收集細(xì)胞,洗滌干凈,,再破碎細(xì)胞,,離心取上清。
(1)培養(yǎng)的細(xì)胞
A,、動物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,,使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融(如果反復(fù)凍融,,破碎效果不好,,就采用超聲波破碎),,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),,仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。
B,、植物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,,置于冰盒上,,用超聲破碎儀,設(shè)置破碎2s,,冷卻30s的方式,,充分破碎細(xì)胞,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),,仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
(2)組織的細(xì)胞
切割標(biāo)本后,稱取1g組織,,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),,去除上清,,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細(xì)胞三遍。再用上述的細(xì)胞破碎方法破碎細(xì)胞,。
3,、土壤:稱取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,,用手工將標(biāo)本充分混勻,。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,。分裝一份待檢測,,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,,測試細(xì)胞內(nèi)蛋白,,要破碎細(xì)胞,。
4、咽拭子:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,,溶解咽拭子頭部,,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),,仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測,,其余冷凍備用,,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。如果是測分泌蛋白,,直接取上清檢測,測試細(xì)胞內(nèi)蛋白,,要破碎細(xì)胞,。
5.植物標(biāo)本中相關(guān)酶或蛋白的測定:(粗提取)
1,、新鮮植物組織請?jiān)谝旱谐浞盅心ィ?br />2,、加入樣品體積9倍的提取液(pH?7.4?PBS緩沖液),3、?請于4度,,8000rpm,,離心30分鐘,取上清并暫時(shí)保存于4度待用,。
三、樣本收集注意事項(xiàng)
1,、不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2,、標(biāo)本采集后盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),,若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3、我們羅列的是通用的樣本處理方法,,無法涵蓋各種樣本,,對于一些特殊樣本,建議實(shí)驗(yàn)人員多參考已發(fā)表的文獻(xiàn),,自行設(shè)計(jì)合理的樣本處理方法,。
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