乳糖和蔗糖的檢測(cè)

摘要：本實(shí)驗(yàn)根據(jù)中國(guó)藥典2010版二部乳糖項(xiàng)下測(cè)試方法,，采用液相色譜 （HPLC） 法結(jié)合示差折光檢測(cè)器分離乳糖與蔗糖，并選擇了4種不同類型的氨基柱對(duì)乳糖和蔗糖的保留及分離情況進(jìn)行了考察,。結(jié)果表明：流動(dòng)相為乙腈:水=75:25（v/v）,，使用Innoval NH₂色譜柱（5 μm，100Å,，4.6×250 mm） 對(duì)兩種物質(zhì)的分離度為2.44,，實(shí)現(xiàn)了乳糖和蔗糖的良好分離，且各物質(zhì)峰形良好,，保留時(shí)間穩(wěn)定,，能夠滿足藥典要求。

關(guān)鍵詞：液相色譜法,；示差檢測(cè)器,；乳糖；蔗糖,；氨基柱,；

前言

乳糖是一種雙糖，由一分子β-D-半乳糖和一分子α-D-葡萄糖在β-1,，4-位形成糖苷鍵相連,，有兩種端基異構(gòu)體：α-乳糖和β-乳糖，在水溶液中可互相轉(zhuǎn)化,。α-乳糖很容易結(jié)合一分子結(jié)晶水,。乳糖甜度約是蔗糖的六分之一。蔗糖容易被酸水解,，水解后產(chǎn)生等量的D-葡萄糖和D-果糖,，其不具有還原性。發(fā)酵形成的焦糖可以用作醬油的增色劑,。乳糖作為一種藥用輔料,，以填充劑或稀釋劑的形式廣泛應(yīng)用于片劑,、膠囊、顆粒劑和凍干產(chǎn)品中,。然而,，一般藥用乳糖來(lái)源于牛奶，可能存在可引起過(guò)敏反應(yīng)的雜蛋白,。因此,，2010版藥典增加了乳糖的檢查項(xiàng)內(nèi)容。本實(shí)驗(yàn)以藥典為依據(jù),，實(shí)現(xiàn)了乳糖與蔗糖的良好分離,。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

1.1.1 主要儀器設(shè)備

液相色譜儀,，示差檢測(cè)器

1.1.2 試劑材料

超純水,；乙腈（色譜純）；蔗糖和乳糖（客戶提供,，分別加水溶解并稀釋成濃度為10 mg/mL的儲(chǔ)備溶液）

色譜柱1-6：規(guī)格均為5 μm,，100Å，4.6×250 mm

1.1.3 色譜條件

流動(dòng)相：A-水,，B-乙腈,，A:B=75:25 （v/v）；

流速：1.0 mL/min,；

柱溫：室溫,；

進(jìn)樣量：10 uL；

2 結(jié)果與討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)比了六種色譜柱對(duì)乳糖及蔗糖的分離效果,，由表1及圖1-5可知，依據(jù)2010版藥典,，流動(dòng)相為乙腈:水=75:25（v/v）,，柱溫為室溫時(shí)，采用Innoval NH₂色譜柱分離效果,，分離度為2.44,。

表1. 不同氨基柱及HILIC色譜柱乳糖與蔗糖分離測(cè)試數(shù)據(jù)對(duì)比（乙腈：水=75：25）