一,、實驗?zāi)康暮鸵?/p>
(1)掌握血液瓊脂培養(yǎng)基(血瓊脂培養(yǎng)基)的制備方法，明確血液瓊脂培養(yǎng)基的用途,。
(2)鞏固掌握一般培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基的配制方法和原理,。
二、基本原理
血液瓊脂培養(yǎng)基可用于分離營養(yǎng)要求高的微生物,。一些病原性真菌或放線菌等難養(yǎng)微生物,，對營養(yǎng)要求高甚至十分苛刻，而動物血是微生物生長繁殖的優(yōu)良營養(yǎng)物,。研究證明,，在45～50℃時加入血液可以保存其中某些不耐熱的生長因子，促進微生物生長,。血液瓊脂培養(yǎng)基也可用于溶血實驗,。
三、實驗材料與設(shè)備
(1)培養(yǎng)基：牛肉膏朊胨培養(yǎng)基,，見天然培養(yǎng)基——牛肉膏朊胨培養(yǎng)基的制備,。
(2)儀器或其他用具：裝有5～10粒玻璃珠(Φ≈3mm)的無菌三角燒瓶、無菌注射器,、無菌平皿等,，其他儀器或用具與天然培養(yǎng)基——牛肉膏朊胨培養(yǎng)基的制備相同。
(3)動物：健康的兔或羊,。
四,、操作步驟
(1)牛肉膏朊胨培養(yǎng)基的制備見天然培養(yǎng)基——牛肉膏朊胨培養(yǎng)基的制備部分,。也可用豆粉瓊脂(pH=7．4～7．6)等營養(yǎng)豐富的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制血液瓊脂培養(yǎng)基。
(2)無菌脫纖維兔血(或羊血)的制備：用配備18號針頭的無菌注射器以無菌操作抽取全血(即未經(jīng)處理的靜脈抽血)(無菌采血操作),，并立即注入裝有無菌玻璃珠(Φ≈3mm)的無菌三角燒瓶中,，然后搖動三角燒瓶1．0min左右，形成的纖維朊塊會沉淀在玻璃珠上,，把含血細胞和血清的上清液傾人無菌容器即得到脫纖維兔血(或羊血),，置冰箱4℃存儲備用。
注意：整個過程必須嚴格無茵操作,。制備脫纖維血液時,，應(yīng)搖動足夠時間以防凝固。也可以直接購買脫纖維兔血(或羊血),。
(3)血液瓊脂培養(yǎng)基的制備：將牛肉膏朊胨瓊脂培養(yǎng)基溶化,，待冷卻至45～50℃時，以無菌操作方式,，按10％(體積分數(shù))的量加入無菌脫纖維兔血(或#血)于培養(yǎng)基中,，立即搖蕩，以便血液和培養(yǎng)基充分混勻,。根據(jù)具體情況,，還可以考慮是否加入10g／L的葡萄糖。
45～50℃加入血液是為了保存其中某些不耐熱的營養(yǎng)物質(zhì)和保證血細胞的完整,，以便于觀察細菌的溶血作用,；同時,，在這種溫度下瓊脂不會凝固,。
(4)迅速以無菌操作倒入無菌平皿中，即成血液瓊脂平板,，注意不要產(chǎn)生氣泡,。
(5)置37℃培養(yǎng)箱24h，如無菌生長即可使用,。
五,、實驗報告
(1)消毒、滅菌和除菌有何異同?請列表比較,。
(2)高壓蒸汽滅菌,、干熱滅菌、紫外線滅菌和微孔濾膜除菌有何異同?列表比較各自的特點和適用范圍,。
(3)培養(yǎng)基制備的一般步驟和注意事項是什么?
(4)各種培養(yǎng)基成分的對于微生物生民的主要功能是什么?
(5)各種培養(yǎng)基的適用范圍是什么?列表比較牛肉膏朊胨培養(yǎng)基,、高氏I號培養(yǎng)基、馬丁氏培養(yǎng)基和血液瓊脂培養(yǎng)基的成分,、特點及應(yīng)用范圍,。
(6)為何培養(yǎng)基制作一般選用瓊脂作為固定劑而不是其他物質(zhì)?瓊脂是*的固定劑嗎?有非瓊脂固定培養(yǎng)基嗎?
(7)培養(yǎng)基配制過程中,，pH如何變化?究竟如何控制和獲得適宜的微生物培養(yǎng)pH?pH的調(diào)節(jié)會影響培養(yǎng)基的物理化學(xué)性質(zhì)嗎?
(8)請對照有關(guān)國家要求，比如WS 233—2002和GB 19489—2008等,，如果開展血液瓊脂培養(yǎng),，注意實驗室基礎(chǔ)條件是否具備?
(9)盡管目前已經(jīng)有很多培養(yǎng)基的配方，但科學(xué)界普遍認為,，于實驗條件和認知水平所限,，人類目前已知的微生物僅占所有微生物的1％，99％左右的微生物尚不為人類所知,，請問原因是什么?你能否更新設(shè)計一種或多種培養(yǎng)基,，來獲取和認識更多的微生物?
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