快速液相色譜柱用超純硅膠裝填,雜質(zhì)含量更低,,粒徑分布窄,,含水量控制嚴(yán)格,PH值中性,,可以滿(mǎn)足用戶(hù)更高的分離需求,。
快速液相色譜柱選擇的條件有這幾個(gè)
填料基質(zhì)
1.硅膠基質(zhì):純度高本錢(qián)低,強(qiáng)度大,,化學(xué)修飾輕易,,但pH值范圍有限。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定,,但經(jīng)過(guò)特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10,。
2.聚合物基質(zhì):應(yīng)用pH值范圍寬,溫度穩(wěn)定(高溫可以達(dá)到80度以上),,機(jī)械強(qiáng)度小,。
顆粒外形
大多現(xiàn)代HPLC填料都是球形顆粒,但有時(shí)是不規(guī)則的顆粒,。球形顆粒提供較低的柱壓,、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長(zhǎng)的柱壽命在使用高粘度的活動(dòng)相時(shí);不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對(duì)低廉的價(jià)格。
顆粒粒徑
粒徑越小柱效越高,、分離度越高,,但同時(shí)會(huì)導(dǎo)致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復(fù)雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱,。
含碳量
含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例,,與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān)。高含碳量進(jìn)步柱容量,、分辨率及分析時(shí)間,,用于要求高分離度的復(fù)雜樣品;低含碳量分析時(shí)間短、展現(xiàn)不同的選擇性,,用于快速分析簡(jiǎn)單樣品及需要高含水活動(dòng)相條件的樣品,。一般C18的含碳量在7-19%不等。
孔徑和比表面積
HPLC吸附介質(zhì)是多孔的顆粒,,盡大多數(shù)的反應(yīng)表面于孔內(nèi),。因此,分子必須進(jìn)進(jìn)孔內(nèi)才能被吸附和分離,。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個(gè)概念,。孔徑小比表面積大,,反之亦然,。比表面積大,增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng),,增加保存,上樣量和復(fù)雜成分的分離度;比表面積小,,平衡時(shí)間快,適合梯度分析,。
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