去垢劑兼容型Bradford試劑盒

Detergent-Compatible Bradford Assay Kit

貨號(hào)：PD-Cde-1000

組分：1000毫升染色液一瓶，5 mg/ml BSA四支,。

保存：4度避光,，一年有效。-20度冷凍可長(zhǎng)期保存,。

在涉及蛋白組學(xué)的實(shí)驗(yàn)中,，經(jīng)常需要檢測(cè)溶液中的蛋白質(zhì)濃度。常用的蛋白定量的方法分為兩大類：一類是銅還原法,，原理是在堿性環(huán)境中利用肽鍵將二價(jià)銅還原為一價(jià)銅,，間接反映蛋白質(zhì)的數(shù)量，如雙縮脲反應(yīng),、改良Lowry法,、BCA法等；另一類是染料結(jié)合法,，原理是通過(guò)染料與蛋白質(zhì)的結(jié)合,，使溶液的光吸收峰發(fā)生改變，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)的數(shù)量,，常用的染料是考馬斯亮藍(lán)G250（Bradford法）,，以及一些金屬-染料復(fù)合物，如兒茶酚-鉬酸復(fù)合物、鄰苯三酚紅-鉬酸復(fù)合物等,。

在蛋白質(zhì)提取和蛋白電泳實(shí)驗(yàn)中,，經(jīng)常會(huì)用到還原劑和去垢劑（表面活性劑），上述蛋白定量方法往往與這些還原劑和去垢劑不兼容：還原劑對(duì)銅還原法有強(qiáng)烈干擾作用,，即使在沒(méi)有蛋白的情況下也能產(chǎn)生顯色反應(yīng),，無(wú)論是樣品本身含有的抗壞血酸，或是緩沖液中含有的巰基乙醇,、二硫蘇糖醇（DTT）等,，均能形成干擾；去垢劑則對(duì)染料結(jié)合法有強(qiáng)烈干擾作用,，如SDS,、Triton X100、Tween-20等,，會(huì)與染料結(jié)合使溶液光吸收峰發(fā)生改變,；高濃度的去垢劑也會(huì)對(duì)銅還原法產(chǎn)生干擾，但是在常用濃度下一般沒(méi)有影響,。這些還原劑和去垢劑在蛋白提取緩沖液和電泳相關(guān)緩沖液中很常見(jiàn),，傳統(tǒng)上解決這些干擾的方法是通過(guò)蛋白沉淀法去除干擾成分，然后重懸蛋白進(jìn)行濃度測(cè)定,，其缺點(diǎn)在于顯著增大了工作量,，并且增加了實(shí)驗(yàn)誤差。

Bradford法不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響,，也不受還原劑的影響,，但是去垢劑可以造成強(qiáng)烈干擾。通過(guò)與染料結(jié)合,，去垢劑抬高背景光吸收值,，使得檢測(cè)靈敏度和檢測(cè)范圍發(fā)生改變，甚至無(wú)法檢測(cè),。去垢劑兼容型Bradford試劑盒通過(guò)對(duì)Bradford法的改進(jìn),，采用特殊配方，消除去垢劑的干擾,，可兼容6% SDS,、4% Tween20、2% Triton-X100,、2% NP40，可耐受各種RIPA裂解液,，對(duì)蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)常用的各種緩沖液均可兼容,。

 RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液，根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度大致可以分為強(qiáng),、中,、弱三類,。RIPA裂解液(強(qiáng))的主要去垢劑成分為1%Triton X-100，1% Sodium Deoxycholate,，0.1% SDS,；RIPA裂解液(中)的主要去垢劑成分為1% NP-40，0.5% Sodium Deoxycholate,，0.1% SDS,；RIPA裂解液(弱)的主要去垢劑成分為1% NP-40，0.25% Sodium Deoxycholate,。即使樣品含兩倍濃度的RIPA裂解液（強(qiáng)）或RIPA裂解液(中),，本產(chǎn)品也可對(duì)BSA蛋白進(jìn)行濃度檢測(cè)，兩倍濃度的RIPA裂解液僅僅引起背景OD值升高約40%,。

Bradford法蛋白定量的原理是在酸性環(huán)境中,，蛋白質(zhì)結(jié)合考馬斯亮藍(lán)G250染料，導(dǎo)致染料的最大光吸收峰發(fā)生位移,，從紅棕色形式（最大吸收峰 465nm）轉(zhuǎn)化為藍(lán)色形式（最大吸收峰 610nm）,。這兩種形式在 595nm 處光吸收差異最大，因此 595nm 是測(cè)定考馬斯染料-蛋白復(fù)合物的藍(lán)色的最佳波長(zhǎng),。由于G250染料在結(jié)合蛋白前后的光吸收波譜有重疊,，直接使用OD595線性擬合，得到的是一個(gè)直徑很大的曲線,，一般情況下可近似看作直線,，在蛋白濃度跨度較大時(shí)會(huì)對(duì)線性擬合造成影響。使用OD595/OD470的比值則可以更好地?cái)M合反應(yīng)過(guò)程,，得到的是一條直線,，可提高檢測(cè)靈敏度。本試劑盒對(duì)BSA蛋白的最大檢測(cè)濃度可超過(guò)4 mg/ml,，檢測(cè)靈敏度為約30ug/ml,，以檢測(cè)樣品體積5ul計(jì)算，即0.15ug的BSA蛋白,。使用Bradford法蛋白定量時(shí),，被檢測(cè)的肽或蛋白質(zhì)的分子量須大于 3KD，低于此分子量的短肽和氨基酸無(wú)法檢測(cè),。

相關(guān)產(chǎn)品：

極敏型 ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒,，貨號(hào)：ECL-F-100，ECL-F-500

超敏型 ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒,，貨號(hào)：ECL-P-100,，ECL-P-500

BCA蛋白定量試劑盒，貨號(hào)：PD-BCA-125，PD-BCA-500

Bradford法蛋白定量試劑盒,，貨號(hào)：PD-Cog-1000