目錄:和元李記（上海）生物技術(shù)有限公司>>核酸合成與提取>>RNA提取>> AP01L204柱式動(dòng)物組織/細(xì)胞總蛋白抽提試劑盒
| 參考價(jià) | 898 |
參考價(jià)：￥ 898
100T
| 100T | 898元 | 999件可售 |
更新時(shí)間：2024-08-07 13:18:30瀏覽次數(shù)：893評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | AP01L204 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
本試劑盒創(chuàng)新性地采用過柱純化的方法,，能夠快速,、溫和、高效地裂解動(dòng)物組織或細(xì)胞,，有效提取總蛋白,，包括離心管柱和經(jīng)過優(yōu)化的細(xì)胞裂解液。與傳統(tǒng)的 RIPA 裂解液相比,，本試劑盒可以提取出更多的蛋白,，避免在細(xì)胞裂解過程中由于 DNA 沉淀和不溶性細(xì)胞碎片導(dǎo)致的部分蛋白丟失。采用過柱純化技術(shù),，最小可處理 20 μL 樣本與裂解液混合物,，最大可達(dá) 500 μL。提供變性和非變性兩種細(xì)胞裂解液,，用戶可根據(jù)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)需求選取不同的裂解液,。【注】：變性裂解液可用于 SDS-PAGE,，Western-blotting,， ELISA 分析；非變性裂解液可用于 IP,，Co-IP,，enzymeassays 等分析。
訂購信息
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
| 柱式動(dòng)物組織/細(xì)胞總蛋白抽提試劑盒 | AP01L204 | 100T |
產(chǎn)品組分
| 產(chǎn)品組分 | 100T |
| 變性裂解液 | 60mL |
| 非變性裂解液 | 60mL |
| 蛋白提取離心管柱 | 100個(gè) |
| 組織研磨棒 | 10個(gè) |
運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸,。常溫保存,，有效期12個(gè)月。【注】：研磨棒可重復(fù)使用,。
使用方法
細(xì)胞樣品
一,、 樣品裂解
變性液提取
1. 去除細(xì)胞培養(yǎng)液，用預(yù)冷的PBS 洗滌兩次,。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液,，如果
細(xì)胞密度過高可增加裂解液的量至250-300uL?！咀ⅰ浚毫呀庖哼^少會(huì)使細(xì)胞裂解不充分,，影響蛋白提取的質(zhì)量。
2. 用槍吹打數(shù)下,，轉(zhuǎn)移裂解液至離心管柱中,。【注】：少量沒有裂解的細(xì)胞不影響最終蛋白提取的質(zhì)量,。
3. 14,000 rpm 離心1 min,。
4. 收集離心管底的裂解液即為細(xì)胞全蛋白提取液?！咀ⅰ浚杭?xì)胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑,，需要用戶加入蛋白酶抑
制劑防止蛋白降解。
非變性液提取
1. 去除細(xì)胞培養(yǎng)液,，用預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次,。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液，如果
細(xì)胞密度過高可增加裂解液的量至250-300uL,?！咀ⅰ浚毫呀庖哼^少會(huì)使細(xì)胞裂解不充分，影響蛋白提取的質(zhì)量,。
2. 用槍吹打數(shù)下,，冰上放置10min后轉(zhuǎn)移裂解液至離心管柱中。
3. 14,000 rpm 離心1 min,。
4. 收集離心管底的裂解液即為細(xì)胞全蛋白提取液,。【注】：細(xì)胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑,，需要用戶加入蛋白酶抑
制劑防止蛋白降解,。
二、懸浮細(xì)胞
變性液提取
1. 收集細(xì)胞0.5~2×107
于1.5mL離心管中,，1mL預(yù)冷的PBS洗滌兩次,，1,000xg 離心3min，棄上清,，重復(fù)三次,。
2. 根據(jù)細(xì)胞沉淀體積加入同體積的預(yù)冷PBS重懸細(xì)胞后,，根據(jù)細(xì)胞量加入對(duì)應(yīng)量的變性裂解液?！咀ⅰ浚罕碇袨橥扑]
用量,；PBS不可多加，只要能使細(xì)胞重懸即可,。
| 細(xì)胞沉淀體積（uL） | 加入裂解液體積（uL） |
| 3 | 20 |
| 5 | 50 |
| 10 | 150 |
| 20 | 250 |
| 40 | 500 |
3. 劇烈震蕩15s后,，轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中?！咀ⅰ浚荷倭繘]有裂解的細(xì)胞不影響最終蛋白提取的質(zhì)量,。
4. 14,000 rpm 離心1min（如果裂解液過于粘稠可增加離心時(shí)間）。
5. 收集離心管底的裂解液即為細(xì)胞全蛋白提取液,?！咀ⅰ浚杭?xì)胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑，需要用戶加入蛋白酶抑
制劑防止蛋白降解,。
非變性液提取
1. 收集細(xì)胞0.5~2×107
于1.5mL離心管中,，1mL預(yù)冷的PBS洗滌兩次，1,000xg 離心3min,，棄上清,，重復(fù)三次。
2. 根據(jù)細(xì)胞量加入對(duì)應(yīng)量的非變性裂解液,?！咀ⅰ浚罕碇袨橥扑]用量,。
細(xì)胞沉淀體積（uL） 加入裂解液體積（uL）
| 細(xì)胞沉淀體積（uL） | 加入裂解液體積（uL） |
| 3 | 20 |
| 5 | 50 |
| 10 | 150 |
| 20 | 250 |
| 30 | 500 |
| 40 | 500 |
3. 劇烈震蕩15s后,，冰上孵育10min。
4. 轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中,。
5. 14,000 rpm 離心1min
6. 收集離心管底的裂解液即為細(xì)胞全蛋白提取液,。【注】：細(xì)胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑,，需要用戶加入蛋白酶抑
制劑防止蛋白降解,。
3、組織樣品
變性液提取
1. 把組織jian切成小碎片,。
2. 加入適當(dāng)裂解液,，一般100mg 組織加入1mL 裂解液?！咀ⅰ浚喝绻呀獠怀浞挚蛇m當(dāng)增加裂解液,。
3. 用研磨棒在1.5mL離心管中研磨組織或者用玻璃勻漿器，直至充分裂解,?！咀ⅰ浚喝绻切募?，皮膚等不易研磨的
組織應(yīng)使用勻漿器勻漿。
4. 轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中,。
5. 14,000 rmp 離心1min（如果裂解液過于粘稠可增加離心時(shí)間）,。
6. 收集離心管底的裂解液即為全蛋白提取液?！咀ⅰ浚喝绻M織樣品非常小,，可剪切后直接加入裂解液并劇烈vortex
裂解。
非變性液提取
1. 組織jian切成小碎片,。
2. 加入適當(dāng)裂解液,，一般100mg 組織加入1ml 裂解液?！咀ⅰ浚喝绻呀獠怀浞挚蛇m當(dāng)增加裂解液,。
3. 用研磨棒研磨組織勻漿器勻漿，直至充分裂解,。冰上放置10min,。【注】：如果是心肌,，皮膚等不易研磨的組織應(yīng)
使用勻漿器勻漿,。
4. 轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中。
5. 14,000 rmp 離心1min,。
6. 收集離心管底的裂解液即為全蛋白提取液,。【注】：如果組織樣品非常小,，可剪切后直接加入裂解液并劇烈vortex
裂解,。
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域,。
2. 本產(chǎn)品不含蛋白酶抑制劑，使用中應(yīng)加入 蛋白酶抑制劑混合物(100×, 不含EDTA)(貨號(hào): AP02L084) 防止蛋白降解,。
3. 本產(chǎn)品不兼容Bradford法測(cè)蛋白濃度,，請(qǐng)使用 BCA蛋白定量試劑盒（貨號(hào)： AP12L025）。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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