目錄:和元李記（上海）生物技術(shù)有限公司>>PCR&q-PCR>>q-PCR>> AN19L032Evagreen (20 × in water)
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
|---|
產(chǎn)品描述
Evagreen 是一種用于實時定量PCR（qPCR）的DNA 結(jié)合染料,。該染料的諸多優(yōu)點使它遠勝于SYBR Green I,。除了有相似的光譜特性,，Evagreen有三個主要特點使它區(qū)別于SYBR Green I ,。
首先,，Evagreen對PCR的抑制性遠小于SYBR Green I。因此,，使用Evagreen進行的qPCR實驗可以使用快速PCR步驟,。同時，Evagreen在實驗中可以使用較高的濃度,，從而獲得遠強于SYBR Green I擴增信號,。較高濃度的Evagreen也消除了“染料重分布"的缺陷，使Evagreen既可用于多重PCR,，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲線分析（HRM）,。該分析正被越來越多的用于PCR后的基因分型和異源雙鏈分析。由于SYBR Green I對PCR的抑制性,，從而要求其使用濃度必須很低,，因此SYBR Green I無法解決由低濃度造成的染料重分布問題,，既不能用于多重PCR也不能用于HRM。同時,，染料重分布問題也可能影響常規(guī)熔解曲線的可靠性,，因為低熔點的DNA鏈可能由于這種原因而無法檢測到。
第二,，Evagreen的穩(wěn)定性強,。在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞,。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里,，也可以反復凍融。與之相反,，SYBR Green I不穩(wěn)定而且降解后對PCR抑制性更強,。
第三，Evagreen降低了細胞膜透性,，因而比SYBR Green 1更加安全,。獨立實驗室的測試結(jié)果顯示，Evagreen既沒有誘變性也沒有細胞毒性,。相反,，雖然SYBR Green I本身誘變性很弱，但它在細胞中可能抑制了正常DNA的修復機制,，使其有誘變增強作用,。考慮到PCR的廣泛使用,，其安全性應該足夠重視,。
訂購信息
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| Evagreen (20 × in water) | AN19L032 | 1 mL |
| Evagreen (20 × in water) | AN19L033 | 5 mL |
產(chǎn)品參數(shù)
λabs/λem = 500/530 nm (結(jié)合DNA)
λabs = 471 nm (未結(jié)合DNA)
運輸與保存
藍冰運輸。4℃短期避光保存,，有效期12個月；-20℃長期避光保存,，有效期24個月,。
使用方法
如下建立實驗體系：（僅供參考）
| 名 稱 | 體 積 |
| 10× 的無Mg2＋聚合酶緩沖液 | 5 µL |
| 50 mM MgCl2 | 2.5 µL |
| 2 mM dNTP | 5 µL |
| 20×Evagreen | 2.5 µL |
| Taq DNA polymerase | 1-5 units |
| F, R Primers | 各0.1-0.5 µM |
| 模板 | 適量 |
| dH2O | to a final volume of 50 µL |
實驗目的
實時定量PCR檢測20× Evagreen
主要試劑
1. Prime
hβ-actin：
forward 5’ -CACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3’
reverse 5’-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-3’
2. HS Taq DNA Polymerase: Thermo(EP0612)
3. Glycerlo: Sigma(V900090-500 mL)
4. BSA: Sigma(A7030)
5. 10 mM dNTPs: Takara(4019)
實驗方案
1. 配制2× Evagreen Buffer
| 2× Evagreen Buffer | ||
| 組分 | 濃度 | 體積（μL） |
| 1 M Tris HCl pH8.5 | 50 mM | 5 |
| 500 mM (NH4)2SO4 | 20 mM | 4 |
| 50 mM MgCl2 | 7 mM | 14 |
| 50% glycerol | 2.5% | 5 |
| DMSO | 10 % | 10 |
| 20× Evagreen | 2× | 10 |
| 10 mM dNTPs | 0.4 mM | 4 |
| 2 % Tween20 | 0.03 % | 1.5 |
| 1 mg/mL BSA | 22 ug/mL | 2.2 |
| H2O | / | 44.3 |
| Total volume | / | 100 |
2. 配制 q-PCR反應體系
| 成分 | 20 μL/體系/管反應 |
| 10 μM primers | 1 μL |
| 模板 | 適量 |
| HS Taq DNA 酶 （5 U/μL） | 0.2 μL |
| 2× Evagreen buffer | 10 μL |
| H2O | 定容至20 μL |
【注】：① DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下。因不同種類的 DNA模板中含有的靶基因的拷貝數(shù)不同,，必要時可進行梯度稀釋,，確定合適的 DNA 模板添加量。cDNA作為模板時的添加量不要超過 PCR 反應液總體積的 10%,。②引物終濃度一般控制在0.1-0.5 μM范圍內(nèi),。
3. 實驗分組：標準對照樣品孔（陽性對照）、檢測樣品孔,、空白對照孔（陰性對照）共三組,，同時進行檢測,，分別進行三次平行實驗。
4. 混勻離心,、上機進行熒光定量PCR（儀器為Roche：LC96）,。
PCR程序：
| 溫度 | 時間 | |
| Step 1 | 95℃ | 2 min |
| Step 2 | 95℃ | 5 sec |
| Step 3 | 60℃ | 30 sec |
| Step 2~3，重復 45個循環(huán) | ||
| 熔解曲線Tm值 57℃~99℃ | ||
5. 保存數(shù)據(jù),，判斷樣本質(zhì)量：
A．檢測樣品與標準品之間的Ct值差
B．檢測樣品與標準品之間的熒光強度差
檢測結(jié)果需達到：以上兩組檢測指標無顯著性差異
注意事項
本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,，不得用于臨床診斷、治療等領域,。
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其他產(chǎn)品簡介
快速細胞凍存液（無血清,、無蛋白）（貨號：AC05L033）
上海李記生物快速細胞凍存液（無血清、無蛋白）可適應于絕大部分腫瘤細胞和常規(guī)細胞,，大部分干細胞（李記已測試細胞種類請關(guān)注）,，凍存細胞可在 -80℃ 長期保存（＞6年）。不含動物源性蛋白,，不含血清成分,，可有效減少各類細菌、病毒和支原體等污染,，保證凍存細胞的安全,。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養(yǎng)成分,，提高細胞存活率和活力,，亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞。
公司簡介
李記生物-專注高效轉(zhuǎn)染試劑
感謝您對于李記生物一直以來的關(guān)注和支持,！希望在未來,，李記能一直伴您前行！
上海李記生物成立于2015年,，坐落于大美浦東,。是集研發(fā)、生產(chǎn),、銷售為一體的國產(chǎn)生物試劑公司,，目前擁有多名復旦、交大,、同濟博士的研發(fā)團隊,，和一支年輕、專業(yè)敢拼的銷售團隊,，以及在全國40余座城市鋪設多名授權(quán)代理商體系,。
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我們于2021年11月正式開始對外承接western blot服務,，我們有超過10年的WB實驗經(jīng)驗的超專業(yè)團隊。用戶只需提供樣本和一抗（李記可幫忙代購）,，我們將為您提供完整的實驗步驟和結(jié)果,，提供專業(yè)的數(shù)據(jù)分析，提供電子版掃膜結(jié)果,。
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