在常溫下由化學反應產(chǎn)生的光，產(chǎn)生電子能級處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì),，后者通過躍遷釋放能量產(chǎn)生光子,，從而導至的發(fā)光現(xiàn)象?；瘜W發(fā)光是一個多步驟的過程,。
學發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)誕生于1977年,，是近十年來在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析,，將高靈敏的化學發(fā)光技術(shù)與高特異性的免疫反應結(jié)合起來建立的微量測定技術(shù)，因此該技術(shù)靈敏度高,、線性范圍寬,、應用范圍廣。而且CLIA與放射免疫分析(RIA),、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(EIA)相比,，操作簡便、反應快速,、無放射污染,，儀器簡單穩(wěn)定且可以實現(xiàn)自動化。
化學發(fā)光免疫分析包含免疫分析系統(tǒng)和化學發(fā)光分析系統(tǒng),。
免疫分析系統(tǒng)是指：抗原抗體標記化學發(fā)光物質(zhì)或酶,，經(jīng)過抗原與抗體反應形成抗原-抗體免疫復合物。
化學發(fā)光分析系統(tǒng)是指在免疫反應結(jié)束后,，利用化學發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化,，形成一個激發(fā)態(tài)的中間體,，這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時，同時發(fā)射出光子,，利用發(fā)光信號測量儀進行檢測,。根據(jù)化學發(fā)光標記物與發(fā)光強度的關(guān)系，可利用標準曲線計算出被測物的含量,。
ECL化學發(fā)光法是目前常用,、靈敏的WesternBlot檢測方法。由于這些底物不會在膜表面沉淀,、牢牢結(jié)合在膜上,，因此可以通過一抗二抗去除液(Strippingbuffer)將親和結(jié)合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足夠強烈而有效解離結(jié)合的抗體,，也要足夠溫和使轉(zhuǎn)移的目標蛋白仍能完整地留在NC膜或PVDF膜上,。通過使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗,，可以非常方便地重新利用使用過的膜檢測其它蛋白,。和重新跑一次SDS-PAGE膠相比，不僅省時省力,，而且可以消除重新上樣而帶來的誤差,，使可比性更強。
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