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PCR原理及反應步驟

閱讀:3294      發(fā)布時間:2022-7-21
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  PCR的原理:
 
  多聚酶鏈式反應(polymerase chain reaction)簡稱PCR技術,,是近30多年發(fā)展起來的一種體外擴增特異性DNA片段的技術,可在數(shù)小時之內對僅有幾個拷貝的基因放大千萬倍,。那么,,PCR的原理是怎樣的呢,?
 
  PCR技術實際上是在模板DNA、引物以及原料(四種脫氧核糖核苷酸)在適宜的反應條件下,,通過DNA聚合酶的酶促反應完成DNA擴增的過程,。
 
  PCR技術的特異性取決于引物和模板DNA結合的特異性。PCR反應分為三步:
 
  1)變性:通過加熱時DNA雙螺旋的氫鍵斷裂,,雙鏈解離成單鏈DNA,;
 
  2)退火:當溫度突然降低時由于模板分子結構較引物復雜的多,而且反應體系中引物DNA量遠大于模板DNA,,使引物和其互補的模板在局部形成雜交鏈,,而模板DNA雙鏈之間互補的機會較少;
 
  3)延伸:在DNA聚合酶和四種脫氧核糖核苷酸第五以及Mg2+存在的條件下,,5’→3’的聚合酶催化以引物為起點的DNA鏈延伸反應,。
 
  4)3步為一個循環(huán),每一個循環(huán)的產物可以作為下一個循環(huán)的模板,,30個循環(huán)左右,,介于兩個引物之間的特異性DNA片段得到了大量的復制,數(shù)量可達2×107個拷貝,。

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