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高效液相色譜儀的使用方法的具體步驟
隨著固定相的發(fā)展,，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離,。液相色譜儀成為解決生化分析問(wèn)題有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率,、高靈敏度,、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析,、醫(yī)藥研究,、環(huán)境分析、無(wú)機(jī)分析等各種領(lǐng)域,。液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向,。質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等,，液相色譜儀連用也發(fā)展很快,，如在環(huán)境污染分析測(cè)定水中的烴類(lèi)，海水中的不揮發(fā)烴類(lèi),，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展,。
高效液相色譜儀的使用方法的具體步驟：
1、色譜柱它包括空柱和填料,?？罩莾?nèi)壁拋光的不銹鋼管，內(nèi)徑為4～5mm,，長(zhǎng)100～250mm,。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈，用勻漿法填充固定相,。將此柱裝入儀器的管路中,，用柱式機(jī)械往復(fù)泵輸入新鮮脫氣的流動(dòng)相。等基線(xiàn)平直后可用苯,、萘,、菲的混合試液，用正己烷或甲醇：水為流動(dòng)相測(cè)定柱效及分離度塔板數(shù)在2～3萬(wàn)/ml以上及分離度在1.5以上者,，柱效好,。
為防止柱污染，常用1個(gè) 50mm長(zhǎng),，4~5mm內(nèi)徑,，裝有硅膠或立柱相同填料的保護(hù)柱接在主柱之前，以延長(zhǎng)色譜柱的壽命,。反相鍵合相柱用畢,。必須用水充分流經(jīng)，以洗去鹽類(lèi)、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚,，再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生,。
2、流動(dòng)相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動(dòng)相放于貯液瓶中,，經(jīng)過(guò)有濾過(guò)頭,、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱，zui后自檢測(cè)器流出或收集或作廢液回收,。用流動(dòng)相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法,，即自洗脫開(kāi)始到結(jié)束，溶劑的配比恒定,。
另一類(lèi)為梯度洗脫法,，即使溶劑的極性強(qiáng)度在色譜過(guò)程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比,，從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過(guò)程中很好分離,，而整個(gè)色譜過(guò)程縮短。必須注意,，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測(cè)的反相液相色譜法中,。
3、檢測(cè)器適用于血藥濃度的檢測(cè)器有紫外線(xiàn)吸收,，熒光發(fā)射和電化學(xué)三種,。紫外檢測(cè)器應(yīng)用于對(duì)紫外光有吸收的藥物，大多數(shù)藥物分子對(duì)紫外光有吸收,，故能較普遍采用,，檢測(cè)限有0.1μg左右。液相色譜儀有固定波長(zhǎng)型,、可變波長(zhǎng)型及掃描器,，既能使流動(dòng)相停流作組分的定性定量檢測(cè)，又能提高測(cè)定靈敏度,，重現(xiàn)性較好,。熒光發(fā)射檢測(cè)器對(duì)能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。