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高效液相色譜儀的使用方法的具體步驟
隨著固定相的發(fā)展,，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離,。液相色譜儀成為解決生化分析問題有前途的方法,。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度,、速度快,、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué),、食品分析、醫(yī)藥研究,、環(huán)境分析,、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向。質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視,，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等,，液相色譜儀連用也發(fā)展很快，如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類,，海水中的不揮發(fā)烴類,，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。
高效液相色譜儀的使用方法的具體步驟：
1,、色譜柱它包括空柱和填料?？罩莾?nèi)壁拋光的不銹鋼管,，內(nèi)徑為4～5mm，長100～250mm,。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈,，用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中,，用柱式機(jī)械往復(fù)泵輸入新鮮脫氣的流動(dòng)相,。等基線平直后可用苯、萘,、菲的混合試液,，用正己烷或甲醇：水為流動(dòng)相測定柱效及分離度塔板數(shù)在2～3萬/ml以上及分離度在1.5以上者，柱效好,。
為防止柱污染,，常用1個(gè) 50mm長，4~5mm內(nèi)徑,，裝有硅膠或立柱相同填料的保護(hù)柱接在主柱之前,，以延長色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢,。必須用水充分流經(jīng),，以洗去鹽類、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚,，再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生,。
2、流動(dòng)相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動(dòng)相放于貯液瓶中,，經(jīng)過有濾過頭,、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱，zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收,。用流動(dòng)相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法,，即自洗脫開始到結(jié)束，溶劑的配比恒定。
另一類為梯度洗脫法,，即使溶劑的極性強(qiáng)度在色譜過程中逐漸增加,。須按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比，從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離,，而整個(gè)色譜過程縮短,。必須注意，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測的反相液相色譜法中,。
3,、檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線吸收，熒光發(fā)射和電化學(xué)三種,。紫外檢測器應(yīng)用于對(duì)紫外光有吸收的藥物,，大多數(shù)藥物分子對(duì)紫外光有吸收，故能較普遍采用,，檢測限有0.1μg左右,。液相色譜儀有固定波長型、可變波長型及掃描器,，既能使流動(dòng)相停流作組分的定性定量檢測,，又能提高測定靈敏度，重現(xiàn)性較好,。熒光發(fā)射檢測器對(duì)能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用,。