高效液相色譜儀(HPLC)是應用高效液相色譜原理,,主要用于分析高沸點不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機化合物的儀器設備,。它由儲液器,、泵,、進樣器、色譜柱,、檢測器,、記錄儀等幾部分組成。HPLC廣泛應用于生命科學,、食品科學,、藥物研究以及環(huán)境研究中。儲液器中的流動相被高壓泵打入檢測系統(tǒng),,樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣本溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),,在兩相中作相對運動時,,經(jīng)過反復多次的“吸附-解吸”的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,,被分離成單個組分依次從柱內流出,,通過檢測器時,樣本濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,,數(shù)據(jù)以圖譜形式輸出檢測結果,。
液相色譜儀按其分離機理,可分為四種類型,。
吸附色譜法的固定相為吸附劑,,色譜的分離過程是在吸附劑表面進行的,不進入固定相的內部,。與氣相色譜不同,,流動相(即溶劑)分子也與吸附劑表面發(fā)生吸附作用。在吸附劑表面,,樣品分子與流動相分子進行吸附競爭,,因此流動相的選擇對分離效果有很大的影響,進口液相色譜儀一般可采用梯度淋洗法來提高色譜分離效率,。
在聚合物的分析中,,吸附色譜一般用來分離添加劑,如偶氮染料,、抗氧化劑,、表面活性劑等,也可用于石油烴類的組成分析,。
分配色譜法
這種色譜的流動相和固定相都是液體,,樣品分子在兩個液相之間很快達到平衡分配,利用各組分在兩相中分配系數(shù)的差異進行分離,類似于萃取過程,。
一般常用的固定液有β(ODPN),、聚乙二醇(PEG400~4000)、*撐乙二醇(TMG)和角鯊烷(SQ),。采用與氣相色譜(GC)同樣的方法,,將固定液涂漬在多孔的載體表面,但在使用中固定液易流失,。目前,,應用較多的是鍵合固定相。在這種固體相中,,固定液不是涂在載體表面,,而是通過化學反應在純硅膠顆粒表面鍵合上某種有機基團。
例如,,利用氯代十八烷基硅烷與硅膠表面的羥基(-OH)之間的反應就可以形成一烷基化表面,。這種固定液的優(yōu)點是不易被流動相剝蝕。在分配色譜法中,,流動相可為純溶劑,,也可以采用混合溶劑進行梯度淋洗,其極性應與固定液差別大一些,,以避免兩者之間相溶,。
在我們做實驗的時候用液相色譜儀分析過程的時候影響溶液遷移的因素比較多。同一樣的組分在不同的色譜調件下保留的值也會不同,,即使是在一樣的測定條件下,。同一組分在不同的色譜柱上面保留的數(shù)值差別也會不同。所以,,液相色譜和氣象色譜相對比,,定性的難度大很多,液相色譜儀分析經(jīng)常使用的定性方法有很多,。比如,,利用已知標準樣品定性,利用檢測器的選擇性定性或者利用紫外檢測器全波長掃描功能等來定性,。