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Thermo液相色譜柱的操作使用
Thermo液相色譜柱在使用前,，進(jìn)行柱的性能測(cè)試,，并將結(jié)果保存起來(lái),，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考,。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品,、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同,；另外,，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是*條件)，只有這樣,，測(cè)得的結(jié)果才有可比性,。
1、樣品的前處理：
a,、使用流動(dòng)相溶解樣品。
b,、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì),。
c、使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì),。
2,、流動(dòng)相的配制：
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：
a,、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力,，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。
b,、流動(dòng)相具有一定惰性,，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
c,、流動(dòng)相的黏度要盡量小,，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降,，延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度),。
d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng),。如使用UV檢測(cè)器,，使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制,。
e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,，否則容易產(chǎn)生氣泡,，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。
f,、在流動(dòng)相配制好后,，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè),，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用,。
3、流動(dòng)相流速的選擇：
因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù),，使用不同的流速可得到不同的柱效,。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求*柱效,，使用*流速,。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min,，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱,，流速0.8ml／min為佳。
當(dāng)選用*流速時(shí),，分析時(shí)間可能延長(zhǎng),。可采用改變流動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí),，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量),。
Thermo液相色譜柱注意：
a．由于甲醇廉價(jià)，對(duì)于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場(chǎng)合除外),。
b．對(duì)于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動(dòng)相,，沒(méi)有提純的己烷不得使用。用水使用超純水(電阻率大于18兆歐),，去離子水及雙蒸水中含有酚類(lèi)雜質(zhì),，有可能影響分析結(jié)果。
c．含水流動(dòng)相zui奸在實(shí)驗(yàn)前配制,，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過(guò)夜,。加入*，防止細(xì)菌生長(zhǎng),。
d．流動(dòng)相要求使用0.45 μm濾膜過(guò)濾,，除去微粒雜質(zhì)。
e．使用HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相,，使用合適的流動(dòng)相可延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,，提高柱性能,。
4、柱性能測(cè)試：
啟動(dòng)液相色譜儀：a,、流動(dòng)相流速設(shè)定為1ml／min,。
b、UV檢測(cè)器波長(zhǎng)設(shè)定為254nm,。
使用出廠測(cè)試時(shí)使用的流動(dòng)相組成及測(cè)試樣品,。
記錄并計(jì)算測(cè)試結(jié)果。