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Thermo液相色譜柱的操作使用
Thermo液相色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測試,，并將結(jié)果保存起來,，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品,、流動相,、柱溫等條件的差異而有所不同；另外,，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是*條件),，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性,。
1,、樣品的前處理：
a、使用流動相溶解樣品,。
b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì),。
c,、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2,、流動相的配制：
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,，因此要求流動相具備以下的特點：
a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中),。
b、流動相具有一定惰性,，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外),。
c、流動相的黏度要盡量小,，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果,；同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度),。
d,、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng),。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制,。
e,、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡,，導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行,。
f、在流動相配制好后,，一定要進(jìn)行脫氣,。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用,。
3,、流動相流速的選擇：
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效,。對于一根特定的色譜柱,，要追求*柱效，使用*流速,。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,，流速一般選擇1ml／min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱,，流速0.8ml／min為佳,。
當(dāng)選用*流速時，分析時間可能延長,?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆?qiáng)度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量),。
Thermo液相色譜柱注意：
a．由于甲醇廉價,，對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。
b．對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相,，沒有提純的己烷不得使用,。用水使用超純水(電阻率大于18兆歐)，去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì),，有可能影響分析結(jié)果,。
c．含水流動相zui奸在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜,。加入*,，防止細(xì)菌生長。
d．流動相要求使用0.45 μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì),。
e．使用HPLC級溶劑配制流動相,，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能,。
4,、柱性能測試：
啟動液相色譜儀：a、流動相流速設(shè)定為1ml／min,。
b,、UV檢測器波長設(shè)定為254nm。
使用出廠測試時使用的流動相組成及測試樣品,。
記錄并計算測試結(jié)果,。