液相色譜柱具有高表面覆蓋率和*封尾的特點,提高了我們色譜柱的穩(wěn)定性,,適合pH值1.5~10.0很寬范圍內(nèi)的色譜分析,。我們對的基質(zhì)上進(jìn)行的鍵合反應(yīng)進(jìn)行了特別的優(yōu)化。*的雙封尾技術(shù)使我們的色譜柱對中性,、極性、酸性和堿性以及螯合化合物的分析具有*的分離效率,。
液相色譜柱采用高純硅膠為基質(zhì),鍵合Phenyl(苯基)后可提供*的選擇性,對雜環(huán)化合物和芳香類化合物有*的選擇性和好的分離效果,。
液相色譜柱分離效果的好壞:
一、硅膠基質(zhì)填料
1,、正相色譜 正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其它具有極性官能團(tuán),,如胺基和氰基的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基或其它極性基團(tuán)極性較強(qiáng),,因此,,分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小,,即極性較弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,,如正己烷,,氯仿,二氯甲烷等,。
2,、反向色譜 反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì),表面鍵合有極性相對較弱官能團(tuán)的鍵合相,。反向色譜所使用的流動相極性較強(qiáng),,通常為水、緩沖液與甲醇,、乙腈等的混合物,。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分zui先被沖洗出,而極性較弱的組分在色譜柱上有更強(qiáng)的保留,。常用的反向填料有C18,、C8、C4等,。
二,、聚合物填料
聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等,其重要優(yōu)點是在PH值為1-14均可使用,。相對于硅膠基質(zhì)的C18填料,,這類填料具有更強(qiáng)的疏水性;大孔的聚合物對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?,F(xiàn)有的聚合特填料的缺點是相對硅膠基質(zhì)填料,,色譜柱柱效較低。
三,、其它無機(jī)填料
其它HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化,,由于其特殊的性質(zhì),一般于特殊的用途,。如石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料,。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ),,不再需其它的表面改性,。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體,,由于在HPLC流動相中不會被溶解,,這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可以用于HPLC,。氧化鋁微粒剛性強(qiáng),,可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,,其優(yōu)點是可以在PH高達(dá)12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物的作用也很強(qiáng),,應(yīng)用范圍受到一定限制,,所以未能廣泛應(yīng)用。新型色譜氧化鋯基質(zhì)填料也可用于HPLC,。商品化的只有聚全物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,,應(yīng)用PH1-14,溫度可達(dá)100℃,。由于氧化鋯填料是zui近幾年才開始研究,,加之面臨的實驗難度,其重要用途與優(yōu)勢尚在進(jìn)行之中,。